孕期砷暴露诱导DNA甲基化致雄性子代胰岛素抵抗的机制研究

发布时间：2025-02-11 19:03

　　目的:以载脂蛋白E基因敲除(ApoE^-/-)小鼠为研究对象,探究孕期砷暴露对雄性子代胰岛素抵抗的影响及DNA甲基化的可能机制。方法:将ApoE^-/-孕鼠随机分为对照组和饮水砷暴露组,其中对照组孕鼠在妊娠期8～15天被给予普通的饮用水;而砷暴露组孕鼠则被给予含砷的饮用水（85ppm亚砷酸钠）,含砷饮用水每3天更换一次,以防止氧化。孕鼠自由分娩,子代小鼠在出生后21天断奶,给予普通标准饲料和普通饮用水。在雄性子代出生后第8周、16周和24周时进行进行糖耐量和胰岛素耐量实验;同时,在第8周和24周用ELISA试剂盒检测血清中的胰岛素、瘦素和脂联素等激素的水平;分离胰腺组织,进行固定、切片,做胰岛素免疫组化染色;分离肝脏组织进行基因组DNA、RNA和蛋白的提取,全基因组甲基化试剂盒检测肝脏全基因组甲基化水平,荧光定量PCR检测葡萄糖激酶（Gck）、6-磷酸葡萄糖（G6P）和固醇调节元件结合蛋白-1c（SREBP-1c）基因的表达水平,用Western blot测定葡萄糖激酶（GCK）蛋白的表达水平。结果:孕期砷暴露对孕鼠和雄性子代的体重影响不明显（P&...

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【学位级别】：硕士

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致谢
摘要
Abstract
英文缩略语表
第一章 引言
第二章 材料和方法
    2.1 主要试剂与仪器
        2.1.1 主要试剂
        2.1.2 主要仪器
    2.2 小鼠的饲养和分组
    2.3 糖耐量(ip GTT)测定
    2.4 胰岛素耐量(ip ITT)测定
    2.5 胰岛素、脂联素、瘦素水平检测
    2.6 胰腺组织病理学检测
        2.6.1 免疫组化染色
    2.7 肝脏基因组甲基化的测定
    2.8 Gck及上下游基因的表达水平
    2.9 肝脏GCK蛋白的表达
        2.9.1 肝脏蛋白提取
        2.9.2 SDS-PAGE电泳
        2.9.3 转膜及封闭
        2.9.4 免疫反应
    2.10 数据统计
第三章 结果
    3.1 砷暴露对Apo E-/-孕鼠和子代体重的影响
    3.2 孕期砷暴露对雄性子代糖耐量的影响
    3.3 孕期砷暴露对雄性子代胰岛素耐量的影响
    3.5 孕期砷暴露对雄性子代胰岛素、瘦素和脂联素水平的影响
    3.6 孕期砷暴露对雄性子代胰岛β细胞数量的影响
    3.7 孕期砷暴露对雄性子代肝脏全基因组甲基化的影响
    3.8 孕期砷暴露对雄性子代肝脏Gck及其上下游基因表达水平的影响
    3.9 孕期砷暴露对雄性子代GCK蛋白表达水平的影响
第四章 讨论
第五章 结论
第六章 创新性和局限性
第七章 综述
参考文献
作者简历



本文编号：4033718