低浓度毒死蜱对神经前体细胞和端脑发育的影响

发布时间：2017-05-30 06:07

  本文关键词：低浓度毒死蜱对神经前体细胞和端脑发育的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：毒死蜱(Chlorpyrifos,CPF)是广泛使用的杀虫剂,能引起胚胎脑发育异常,造成子代动物智能损伤,其毒性机制尚不清楚。本文探讨其胚胎神经前体细胞发育损伤机制。首先,对妊娠7.5-11.5天的母鼠,连续5天暴露0、1、3、5mg/kg CPF,制备胚胎14天切片,分别进行HE染色和Pax6、Tbr2、Tuj1免疫组化染色。结果发现,当CPF暴露浓度为5mg/kg时,侧脑室壁VZ层细胞减少15.8%,CP层细胞增加28.7%,其余浓度各层细胞没有显著变化。CPF引起Pax6和Tbr2阳性细胞数量减少,但没有引起Tuj1阳性细胞的数量变化。然后,对妊娠14天母鼠以3h为间隔多次暴露5mg/kg CPF,染毒期间注射Brdu标记S期增殖细胞,制备胚胎Brdu免疫组化切片。结果表明,CPF造成标记1、3、6h时Brdu+核更多地分布于侧脑室壁基底部分,而较少分布于顶端,提示核迁移运动减缓;在妊娠7.5-11.5母鼠暴露连续5天的5mg/kg/d CPF,E14时加以Brdu标记,Brdu免疫组化结果发现,CPF仍能引起核迁移运动减缓,但影响程度较轻。最后,对妊娠7.5-11.5天的母鼠,连续5天暴露5mg/kg CPF,制备E12、14、18海马冠状切片,分析海马区域细胞的数量。研究结果发现,CPF引起E12海马原基细胞减少18.6%,E14海马DG原基细胞减少13.6%,E18海马CA3、DG区细胞减少21.6%和12.6%。本实验表明,CPF能降低神经前体细胞的核移行速度,抑制增殖性前体细胞的数量,改变侧脑室壁细胞分层结构,并能扰乱海马脑区发育。我们的研究为CPF致成年期智能损伤提供了胚胎期的结构基础。
【关键词】：毒死蜱 神经发育毒性 神经前体细胞 周期性核移行 海马发生
【学位授予单位】：浙江工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R114
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 主要缩略词一览表11-12
• 第一章 综述12-23
• 1.1 引言12-13
• 1.2 胚胎神经发育13-18
• 1.2.1 侧脑室壁的发育13-14
• 1.2.2 胚胎神经前体细胞14-16
• 1.2.3 APs的核移行现象16-18
• 1.3 海马脑区发育18-20
• 1.3.1 海马的形态结构18-19
• 1.3.2 海马形态发生19-20
• 1.4 农药神经发育毒20-22
• 1.4.1 细胞毒性21
• 1.4.2 神经递质毒性21
• 1.4.3 认知行为毒性21-22
• 1.5 研究背景和意义22
• 1.6 研究内容和创新点22-23
• 第二章 毒死蜱对胚胎侧脑室壁组织结构的影响23-39
• 前言23
• 2.1 实验用材23-27
• 2.1.1 实验动物23
• 2.1.2 主要耗材及仪器23-25
• 2.1.3 试剂配制25-27
• 2.2 方法27-31
• 2.2.1 动物分组及处理27
• 2.2.2 胚胎制备与固定27
• 2.2.3 石蜡切片27-28
• 2.2.3.1 石蜡包埋27-28
• 2.2.3.2 切片28
• 2.2.4 HE染色28
• 2.2.5 Pax6、Tbr2、Tuj1免疫组化28-29
• 2.2.6 侧脑室壁定位与分层29-31
• 2.2.7 统计分析31
• 2.3 实验结果31-37
• 2.3.1 CPF对侧脑室壁细胞形态的影响31-32
• 2.3.2 CPF对E14侧脑室壁各分层细胞的影响32-33
• 2.3.3 CPF对APs的影响33-34
• 2.3.4 CPF对BPs的影响34-36
• 2.3.5 CPF对神经元的影响36-37
• 2.4 讨论37-39
• 第三章 毒死蜱对顶端前体细胞周期性核移行的影响39-48
• 前言39
• 3.1 实验用材39-40
• 3.1.1 实验动物39
• 3.1.2 主要耗材及仪器39
• 3.1.3 试剂配制39-40
• 3.2 方法40-42
• 3.2.1 动物分组及处理40
• 3.2.2 胚胎制备与固定40-41
• 3.2.3 石蜡切片41
• 3.2.4 免疫组化41
• 3.2.5 定位及计数41-42
• 3.2.6 统计分析42
• 3.3 结果42-46
• 3.3.1 CPF预先暴露对INM的影响42-44
• 3.3.2 CPF即时暴露对INM的影响44-46
• 3.4 讨论46-48
• 第四章 毒死蜱对胚胎海马发育的影响48-61
• 前言48
• 4.1 实验用材48
• 4.1.1 实验动物48
• 4.1.2 主要耗材及仪器48
• 4.1.3 试剂配制48
• 4.2 方法48-50
• 4.2.1 动物分组及处理48-49
• 4.2.2 胚胎制备与固定49
• 4.2.3 石蜡切片49
• 4.2.4 HE染色49
• 4.2.5 各时期海马形态观察及计数49-50
• 4.2.6 统计分析50
• 4.3 结果50-60
• 4.3.1 CPF对E12海马原基细胞的影响50-52
• 4.3.2 CPF对E14海马原基细胞的影响52-56
• 4.3.3 CPF对E18海马细胞的影响56-60
• 4.4 讨论60-61
• 第五章 实验总结与展望61-62
• 参考文献62-75
• 致谢75-76
• 读研期间发表的学术论文76

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  本文关键词：低浓度毒死蜱对神经前体细胞和端脑发育的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

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