检测牛奶中布鲁氏菌套式PCR方法的建立

发布时间：2017-08-29 09:01

  本文关键词：检测牛奶中布鲁氏菌套式PCR方法的建立

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【摘要】：为检测牛奶中的布鲁氏菌,通过对布鲁氏菌外膜蛋白31 k Da的一段基因进行套式PCR扩增,建立从临床奶样中检测布鲁氏菌的方法。改进了奶样中布鲁氏菌基因组DNA的提取方法,通过正交试验的方法优化了套式PCR试验的反应条件,优化后的一扩PCR反应条件为:退火温度56.4℃,Mg~(2+)浓度1.5 m M,rTaq酶0.2μL,引物0.3μM,d NTP浓度0.2 m M;二扩PCR反应条件为:退火温度53.3℃,Mg~(2+)浓度1.5 m M,rTaq酶0.25μL,引物0.4μM,d NTP浓度0.1 m M。其敏感性为8 CFU·m L~(-1),比细菌分离试验敏感1 000倍;与大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌、隐秘杆菌和克雷伯氏菌均无交叉反应;与试管凝集试验检测布鲁氏菌病的阳性符合率是100%,阴性符合率是86.36%。试验建立的套式PCR方法可用于检测奶样中布鲁氏菌。
【作者单位】： 黑龙江八一农垦大学动物科技学院;
【关键词】： 布鲁氏菌 套式PCR 奶样 奶牛
【基金】：国家科技计划课题(2012BAD12B05-2)
【分类号】：R155.57
【正文快照】： 布鲁氏菌病(Brucellosis)于1859年由Morston首次报道[1],是目前世界上流行最广、危害最大的人兽共患病之一[2],给世界的畜牧业以及人类的健康带来巨大的威胁,世界动物卫生组织(OIE)已将其列为需要通报的动物疫病,我国将其列为二类动物疫病[3]。 传统的诊断方法有很多,包括平，

本文编号：752415