氯乙烯生物标志物测定方法研究

发布时间：2017-09-01 23:38

  本文关键词：氯乙烯生物标志物测定方法研究

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【摘要】：氯乙烯(VCM)是一种重要的工业化合物,我国是氯乙烯的生产和使用大国,由氯乙烯共聚物合成的性能各异的树脂在我国各行业都有广泛的应用。氯乙烯毒性较大,可以对心、肺、脑、血液等多个器官和系统产生毒性,长期接触可致肝脏和脾脏损害、肢端溶骨症；氯乙烯是明确的人类致癌物,可致肝血管瘤,1987年氯乙烯单体被国际癌症研究机构(IARC)列为1类致癌物。我国《工作场所有害因素职业接触限值》规定氯乙烯时间加权平均容许浓度(PC-TWA)为10 mg/m3,短时间接触容许浓度(PC-STEL) 20mg/m3,国内外尚未制定氯乙烯代谢产物的职业生物接触限值,为制定职业接触生物限值提供技术基础特进行本研究。氯乙烯进入人体后,大部分以原型形式随呼吸经肺排出体外,其余部分主要在肝脏中通过肝乙醇脱氢酶(ADH2)和肝微粒体细胞色素P450酶(主要是CYP2E1)代谢转化,其代谢终产物氯乙酸、羟乙基半胱氨酸、亚硫基二乙酸(TDGA)由尿液排出体外；氯乙烯在代谢过程中产生的活性中间产物(主要为CEO和CAA)可以与DNA等大分子物质发生烷化反应,形成εdA、7-(2’-氧代乙基)鸟嘌呤、εdC和N2,3εdG四种DNA加合物。研究表明,尿液中的TDGA含量与氯乙烯的外暴露浓度具有强相关性,其可以作为氯乙烯的暴露生物标志物,但目前缺乏前处理简单、操作便捷、适于推广的检测方法。目前有研究认为氯乙烯导致的εdA DNA加合物可以作为氯乙烯的生物有效剂量标志物,而其所致的εdC DNA加合物是否能作为氯乙烯的生物标志物则缺乏相应的数据支持。本文建立了氯乙烯代谢产物TDGA的固相萃取-离子色谱测定法,初步探讨εdA和εdC作为氯乙烯生物标志物的适用性。研究内容主要包括以下两部分内容：1.建立了测定尿液中TDGA的固相萃取-离子色谱法。尿液样品经离心、C18固相萃取小柱净化后,由AS19阴离子交换色谱柱分离,电导检测器检测,以保留时间定性,峰面积与外标法定量。标准曲线的测定范围为0.05-50μg/ml,相关系数r=0.9999,方法检出限为0.10μg/ml,方法定量下限为0.30μg/ml,批内精密度为1.3%-5.1%,批间精密度为0.50%～8.8%,方法加标回收率为80.1%-104.2%。样品在-20℃条件下可保存14 d。样品中共存和可能共存的氯乙酸、二氯乙酸、三氯乙酸及其它内源性离子化合物均不干扰其测定。采用该法对氯乙烯职业接触和对照组人员尿中的TDGA进行了检测应用,结果显示氯乙烯职业接触组大部分都能检测出TDGA,而对照组TDGA均小于方法检出限。2.以职业暴露氯乙烯操作工为接触组和非职业暴露的相似工龄的职业行政人员为对照组,采用同位素内标[15N5]-εdA和[15N3]-sdC UPLC-ESI-MS/MS方法对接触组和对照组人员的血液中氯乙烯DNA加合物εdA、εdC进行了检测,以离子色谱法对尿中的TDGA进行了检测,统计分析结果显示暴露组血样中εdA和εdC水平都高于对照组血样中εdA和εdC水平,且差异具有显著性(P0.05)；εdA和εdC水平具有显著相关性：未发现吸烟、饮酒和年龄对εdA和εdC的水平有显著的影响；初步验证了εdA、εdC作为氯乙烯暴露标志物的适用性。
【关键词】：固相萃取 离子色谱 亚硫基二乙酸 DNA加合物 UPLC-ESI-MS/MS
【学位授予单位】：中国疾病预防控制中心
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R134.4
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-10
• 前言10-18
• 1 研究的目的和意义10
• 2 氯乙烯概述10-12
• 3 亚硫基二乙酸(TDGA)及其检测方法研究现状12-15
• 3.1 气相色谱法和气相色谱-质谱法13-14
• 3.2 伏安法14
• 3.3 毛细管电泳法14-15
• 3.4 液相-质谱联用法15
• 4 氯乙烯的DNA加合物15-18
• 第一部分 固相萃取-离子色谱法测定尿液中的亚硫基二乙酸18-37
• 1 前言18-21
• 1.1 固相萃取法概述18-19
• 1.2 离子色谱法概述19-21
• 2 实验部分21-24
• 2.1 仪器和试剂21-22
• 2.2 色谱条件22
• 2.3 样品采集、运输与保存22
• 2.4 尿液的前处理方法22-23
• 2.5 标准曲线的配制和样品测定23-24
• 2.6 尿样密度的校正24
• 3 结果与讨论24-36
• 3.1 检测方法的选择24-25
• 3.2 离子色谱条件的优化25-27
• 3.3 样品前处理方法的选择27-28
• 3.4 固相萃取条件的优化28-30
• 3.5 标准曲线、线性范围与检出限30-32
• 3.6 准确度实验32-33
• 3.7 精密度实验33-34
• 3.8 样品稳定性实验34
• 3.9 干扰实验34-36
• 4 实际样品测定36
• 5 小结36-37
• 第二部分 氯乙烯暴露生物标志物的研究37-53
• 1 前言37-38
• 2 研究对象38
• 3 实验部分38-46
• 3.1 仪器38-39
• 3.2 试剂39-40
• 3.3 标准品的合成40
• 3.4 标准品的纯化40-42
• 3.5 标准品的定量42-43
• 3.6 样品处理43-44
• 3.7 仪器条件44-45
• 3.8 标准曲线的配制45-46
• 3.9 血样中εdA和εdC以及尿液中TDGA含量的检测46
• 3.10 数据分析方法46
• 4 结果46-50
• 4.1 研究对象的一般情况46-47
• 4.2 样品中εdA、εdC、TDGA测定结果47
• 4.3 样品中εdA、εdC和TDGA统计分析结果47-50
• 5 讨论50-53
• 5.1 暴露组与对照组的选择50-51
• 5.2 Etheno-DNA加合物指标的选择51-52
• 5.3 DNA加合物检测方法的选择52
• 5.4 氯乙烯暴露生物标志物分析52-53
• 6 小结53
• 结论53-55
• 参考文献55-61
• 硕士期间发表的论文61-62
• 致谢62-63
• 附录一 发表文章一63-69
• 附录二 发表文章二69-77
• 附录三 综述77-91
• 附录四 个人简介91

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

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中国硕士学位论文全文数据库 前2条

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本文编号：775127