氟对小鼠海马微管蛋白Tubulin表达的影响

发布时间：2017-09-06 19:52

  本文关键词：氟对小鼠海马微管蛋白Tubulin表达的影响

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【摘要】：[目的]研究氟对小鼠海马微管蛋白的影响,观察小鼠海马微管形态的变化,并测定小鼠海马组织中Tubulin-α、Tubulin-β的基因水平和蛋白水平的变化,探讨不同浓度氟对小鼠海马微管蛋白的影响。[方法]选择体重为(22±2)g的健康昆明系小鼠60只,基础饲料及去离子水饮水一周适应环境后,随机分为4组,每组15只,每组分别为对照组、低剂量组(25mg/LNaF)、中剂量组(50mg/L NaF)、高剂量组(100mg/L NaF),每个试验组均给以基础饲料,自由饮食饮水,每天记录小鼠饮水饮食情况,每周记录小鼠体重。饲养60日,称重处死。透射电镜观察小鼠海马超微结构的病理变化；提取小鼠海马组织中总RNA,利用RT-PCR,分别测定其中Tubulin-α、Tubulin-β基因mRNA的相对表达量；制作切片,利用免疫组化定位检测Tubulin-α、Tubulin-β蛋白的表达的位置和变化；提取小鼠海马组织中总蛋白,利用Western Blot进一步检测其中Tubulin-α、Tubulin-β蛋白的表达量。[结果](1)与对照组相比,低氟组微管连贯性较差,微管数量多、部分断裂,组织紧密,少量微管倾斜于主轴,截面微管均匀排列；中氟组微管连贯性差,组织较为松散,微管弯曲且与主轴不平行；高氟组微管连贯性差,断裂严重,组织松散,排布密度明显减小,截面微管排列不均匀。氟浓度越高,微管形态受氟的影响越大。(2)与对照组相比,低氟组小鼠海马组织中基因Tubulin-α 和 Tubulin-β mRNA表达量升高,差异不显著(P0.05,而在中氟组和高氟组均降低,其中高氟组差异显著(P0.05(3)通过免疫组化检测发现,高氟组Tubulin-α 和 Tubulin-β阳性产物交错弯曲,由细条状变为成片的棕色,锥体细胞层稀薄,细胞减小,细胞层疏松、紊乱,细胞质变薄。与对照组相比较,低氟组小鼠海马组织中微管蛋白Tubulin-α、Tubulin-β蛋白表达量升高,差异不显著(P0.05；在中氟组和高氟组微管蛋白Tubulin-α、Tubulin-β蛋白表达量均降低,其中高氟组差异显著(P0.05)。[结论]氟使小鼠海马组织微管蛋白的形态发生改变,在本试验的时间内低浓度氟可促进微管蛋白r(?)RNA和蛋白的表达,而高浓度的氟抑制微管蛋白raRNA和蛋白的表达,不同浓度的氟均会破坏小鼠海马的骨架蛋白,从而影响小鼠大脑发育。但是在一定时间内低浓度氟对海马组织微管蛋白表达的促进机制还有待于进一步研究。
【关键词】：氟 海马组织 微管蛋白-α 微管蛋白-β
【学位授予单位】：山西农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R114;Q78
【目录】：

• 摘要7-9
• 前言9-15
• 1 氟对大脑神经系统的的影响9-12
• 1.1 氟在脑组织中的含量以及对脑重的影响9-10
• 1.2 氟对大脑中枢神经系统的影响10-11
• 1.2.1 氟对大脑的形态学变化10-11
• 1.2.2 氟对动物大脑DNA损伤的影响11
• 1.2.3 氟对大脑氧化损伤的影响11
• 1.3 氟对学习记忆和智商的影响11-12
• 2 微管蛋白12-13
• 3 研究目的与意义13
• 4 技术路线13-15
• 第一章 氟对小鼠海马微管形态的影响15-19
• 1 材料与方法15-16
• 1.1 材料15
• 1.1.1 试验动物15
• 1.1.2 主要试剂15
• 1.2 方法15-16
• 1.2.1 动物模型的建立15-16
• 1.2.2 样品的采集16
• 1.2.3 电镜切片的制备16
• 1.2.4 图像采集16
• 2 结果与分析16-17
• 3 讨论17-18
• 4 小结18-19
• 第二章 氟对小鼠海马微管蛋白相关基因表达量的影响19-28
• 1 材料与方法19-22
• 1.1 实验材料19-20
• 1.1.1 试验动物19
• 1.1.2 试验主要试剂19
• 1.1.3 主要仪器设备19-20
• 1.2 实验方法20-22
• 1.2.1 动物模型的建立20
• 1.2.2 样品的采集20
• 1.2.3 小鼠海马总RNA的提取20-21
• 1.2.4 总RNA质量检测21
• 1.2.5 荧光定量PCR检测海马中Tubulin-α、Tubulin-β基因mRNA的表达量21-22
• 2 结果与分析22-26
• 2.1 总RNA质量及浓度鉴定22-23
• 2.2 海马组织Tubulin-α和Tubulin-β的扩增曲线以及熔解曲线23-25
• 2.3 不同浓度氟对小鼠海马中Tubulin-α、Tubulin-β基因mRNA表达量的影响25-26
• 3 讨论26-27
• 4 小结27-28
• 第三章 氟对小鼠海马微管蛋白细胞结构和蛋白表达的影响28-38
• 1 材料与方法28-32
• 1.1 材料28-29
• 1.1.1 试验动物28
• 1.1.2 主要试剂28-29
• 1.1.3 主要仪器设备29
• 1.2 方法29-32
• 1.2.1 动物模型的建立29
• 1.2.2 样品的采集29
• 1.2.3 主要试剂的配制29-30
• 1.2.4 石蜡切片脱蜡30
• 1.2.5 免疫组化石蜡切片热修复染色程序30-31
• 1.2.6 Western Blot检测31-32
• 1.2.7 SDS-PAGE电泳检测蛋白32
• 2 结果与分析32-36
• 2.1 氟对小鼠海马微管蛋白Tubulin-α和Tubulin-β细胞结构的影响32-35
• 2.2 微管蛋白Tubulin-α和Tubulin-β免疫印迹结果35-36
• 3 讨论36-37
• 4 小结37-38
• 全文结论38-39
• 参考文献39-43
• Abstract43-45
• 致谢45

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：805123