壬基酚及其异构体对NCTC Clone 1469小鼠肝细胞株的影响

发布时间：2017-09-12 23:36

  本文关键词：壬基酚及其异构体对NCTC Clone 1469小鼠肝细胞株的影响

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【摘要】：壬基酚(4-n-Nonylphenol,4-n-NP)是生活中广泛存在的环境激素,它们在自然环境中不易降解,具有较强的生物累积性,对于机体内各脏器都具有损害作用,研究4-n-NP及其同分异构体的生物学效应已成为热点。本文以体外培养的NCTC Clone 1469小鼠肝细胞株作为毒理学模型,探讨了4-n-NP对NCTC Clone 1469细胞的毒性作用、氧化应激作用、凋亡作用,以及壬基酚异构体对NCTC Clone 1469细胞胆汁酸分泌的影响,为壬基酚及其异构体的环境风险评估提供理论依据。首先,本论文探讨了4-n-NP对NCTC Clone 1469细胞的毒性作用,得出结果如下:(1)60、80、100μmol/L 4-n-NP作用于NCTC Clone 1469细胞可显著抑制细胞生长,改变细胞形态,并导致培养液中LDH、ALT、AST活性显著升高;(2)4-n-NP(1-40μmol/L)可上调NCTC Clone 1469细胞内雌激素受体ERα、ERβmRNA及蛋白表达;(3)雌激素拮抗剂ICI 182780无法减弱4-n-NP对NCTC Clone 1469细胞的毒性作用。结果表明,4-n-NP可对NCTC Clone 1469细胞产生毒性作用,并在一定浓度范围内可刺激细胞内雌激素受体表达,且两者无关。第二,本论文从抗氧化酶系统及过氧化产物两方面综合探讨了4-n-NP对NCTC Clone 1469细胞的氧化应激作用,得出结果如下:(1)4-n-NP可使NCTC Clone 1469细胞内ROS水平及MDA含量升高;(2)60μmol/L 4-n-NP显著降低NCTC Clone 1469细胞内SOD、CAT活性;(3)抗氧化剂NAC可显著减弱4-n-NP对NCTC Clone 1469细胞产生的毒性作用。由此结果推测4-n-NP对NCTC Clone 1469细胞产生的毒性作用或与氧化应激作用有关。第三,本论文利用流式双染法及免疫印迹法探讨了4-n-NP对NCTC Clone1469细胞的凋亡作用及潜在机制,得出结果如下:(1)4-n-NP可活化NCTC Clone1469细胞内凋亡相关蛋白酶(Caspase-3、Caspase-12);(2)20-60μmol/L 4-n-NP可上调NCTC Clone 1469细胞内促凋亡相关蛋白Bax的表达,同时下调细胞内抗凋亡蛋白Bcl-2的表达;(3)1-60μmol/L 4-n-NP药物组均可导致NCTC Clone1469细胞凋亡率及钙离子水平升高且具有浓度依赖性;(4)Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK或Caspase-12抑制剂Z-ATAD-FMK均可抑制NCTC Clone 1469细胞凋亡并降低细胞内钙离子水平。最后,本论文通过酶联免疫吸附实验、反转录聚合酶链式反应探究12种4-NP异构体对NCTC Clone 1469细胞总胆汁酸分泌量及胆汁酸代谢相关基因表达的影响,结果表明60μmol/L 4-NP37、4-NP111、4-NP112、4-NP194可使NCTC Clone1469细胞总胆汁酸分泌量显著升高,并促进细胞内雌激素受体ERα、胆汁酸代谢相关基因(CYP7A1、CYP27A1、CYP8B1)表达,推测此4种壬基酚异构体促使NCTC Clone 1469细胞总胆汁酸分泌量增加或与刺激ERα、CYP7A1、CYP27A1、CYP8B1 mRNA表达有关。综上所述,本研究明确了4-n-NP对NCTC Clone 1469小鼠肝细胞所造成的损伤作用包括细胞毒性、氧化应激及凋亡;4-NP异构体可改变NCTC Clone 1469小鼠肝细胞总胆汁酸分泌量,其潜在途径或与4-n-NP影响细胞内雌激素受体基因、胆汁酸代谢相关基因表达有关。
【关键词】：壬基酚 壬基酚异构体 氧化应激作用 细胞凋亡 雌激素效应
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R114;O625.3
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 符号说明10-11
• 第1章 绪论11-17
• 1.1 环境激素11-12
• 1.1.1 环境激素的定义11
• 1.1.2 环境激素污染状况与危害11
• 1.1.3 环境激素毒性作用机制11-12
• 1.2 壬基酚12-13
• 1.2.1 壬基酚的来源12
• 1.2.2 壬基酚的检测方法12-13
• 1.2.3 壬基酚的生物毒性作用13
• 1.3 壬基酚异构体13-15
• 1.3.1 壬基酚异构体的分离与测定13-14
• 1.3.2 壬基酚异构体在环境中的分布14
• 1.3.3 壬基酚异构体的雌激素效应14-15
• 1.4 本研究的目的、主要研究内容及创新性15-17
• 1.4.1 研究目的15
• 1.4.2 主要的研究内容15
• 1.4.3 主要的创新点15-17
• 第2章 4-n-NP对NCTC Clone 1469小鼠肝细胞株的毒性作用17-37
• 2.1 引言17-18
• 2.2 材料与方法18-28
• 2.2.1 实验材料18-21
• 2.2.2 实验方法21-28
• 2.3 实验结果28-34
• 2.3.1 4-n-NP对NCTC Clone 1469细胞存活率的影响28-29
• 2.3.2 细胞形态学观察结果29
• 2.3.3 4-n-NP对细胞培养上清液中LDH、ALT、AST活性的影响29-30
• 2.3.4 4-n-NP对NCTC Clone 1469细胞ERα、ERβ m RNA表达的影响30-31
• 2.3.5 4-n-NP对NCTC Clone 1469细胞ERα、ERβ 蛋白表达的影响31-33
• 2.3.6 4-n-NP引起NCTC Clone 1469细胞毒性作用与雌激素受体的关系33-34
• 2.4 讨论34-35
• 2.5 本章小结35-37
• 第3章 4-n-NP对NCTC Clone 1469小鼠肝细胞株的氧化应激作用37-48
• 3.1 引言37
• 3.2 材料与方法37-40
• 3.2.1 实验材料37-39
• 3.2.2 实验方法39-40
• 3.3 实验结果40-45
• 3.3.1 4-n-NP对NCTC Clone 1469细胞内ROS水平的影响40-43
• 3.3.2 4-n-NP对NCTC Clone 1469细胞内MDA含量、SOD及CAT活性的影响43-44
• 3.3.3 4-n-NP引起NCTC Clone 1469细胞毒性作用与氧化应激的关系44-45
• 3.4 讨论45-46
• 3.5 本章小结46-48
• 第4章 4-n-NP对NCTC Clone 1469小鼠肝细胞株凋亡的影响48-62
• 4.1 引言48
• 4.2 材料与方法48-54
• 4.2.1 实验材料48-51
• 4.2.2 实验方法51-54
• 4.3 实验结果54-59
• 4.3.1 4-n-NP对NCTC Clone 1469细胞内Caspase-3 及Caspase-12活性的影响54-55
• 4.3.2 4-n-NP对NCTC Clone 1469细胞凋亡的影响55
• 4.3.3 4-n-NP对NCTC Clone 1469细胞内钙离子水平的影响55-58
• 4.3.4 4-n-NP对NCTC Clone 1469细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的影响58-59
• 4.4 讨论59-61
• 4.5 本章小结61-62
• 第5章 4-NP异构体对NCTC Clone 1469小鼠肝细胞株胆汁酸分泌的影响62-79
• 5.1 引言62-63
• 5.2 材料与方法63-67
• 5.2.1 实验材料63-65
• 5.2.2 实验方法65-67
• 5.3 实验结果67-77
• 5.3.1 4-NP异构体对NCTC Clone 1469细胞总胆汁酸分泌的影响67-69
• 5.3.2 4-NP_37对NCTC Clone 1469细胞ERα、CYP7A1、CYP27A1、CYP8B1 m RNA表达的影响69-71
• 5.3.3 4-NP_111对NCTC Clone 1469细胞ERα、CYP7A1、CYP27A1、CYP8B1 m RNA表达的影响71-73
• 5.3.4 4-NP_112对NCTC Clone 1469细胞ERα、CYP7A1、CYP27A1、CYP8B1 m RNA表达的影响73-75
• 5.3.5 4-NP_194对NCTC Clone 1469细胞ERα、CYP7A1、CYP27A1、CYP8B1 m RNA表达的影响75-77
• 5.4 讨论77-78
• 5.5 本章小结78-79
• 第6章 结论与展望79-81
• 6.1 结论79-80
• 6.2 进一步的研究方向80-81
• 致谢81-82
• 参考文献82-90
• 攻读学位期间研究成果90

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 肖全伟,黎源倩,吴德生;高效液相色谱法测定大鼠组织中双酚A和4-壬基酚浓度[J];色谱;2004年06期

2 范奇元,李卫华,金泰^，

本文编号：840202