不同无机纳米材料对GFP基因转染效率的影响和结核保护性抗原基因TB10.4真核表达载体的构建

发布时间：2017-09-18 22:21

  本文关键词：不同无机纳米材料对GFP基因转染效率的影响和结核保护性抗原基因TB10.4真核表达载体的构建

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【摘要】：目的：随着纳米技术与生物医学技术的飞速发展和交叉融合，无机纳米材料在医学领域的应用日益广泛，为疾病的治疗、疫苗设计、早期诊断提供了新的思路。20世纪80年代以来全球结核病疫情日趋严峻，新型高效的结核病疫苗和诊断试剂的研发越发迫切。将无机纳米材料应用到结核疫苗的研究有望取得某些突破性进展。本研究选取3种无机纳米材料（纳米SiO2、ZnO纳米管和ZnO纳米棒），探究它们的细胞毒性和对绿色荧光蛋白（GFP，Green Fluorescent Protein)基因转染效率的影响，并构建基因TB10.4的真核表达重组质粒pEGFP-N1-TB10.4，为进一步将纳米材料运用到结核疫苗的研究奠定基础。 方法：利用3种纳米材料分别作用于THP-1细胞和RAW267.4细胞，确定对细胞活性无明显影响的最适转染浓度，，进而装载GFP真核表达载体转染RAW267.4细胞，在荧光显微镜下观测绿色荧光蛋白的表达情况，与脂质体和裸质粒的转染效率相比较进而确定纳米材料对GFP基因的转染效率。利用分子生物学技术克隆结核分枝杆菌保护性抗原TB10.4基因并将其与真核表达载体pEGFP-N1连接，构建重组质粒pEGFP-N1-TB10.4。结果：1.确定了对细胞活性无明显影响的最适转染浓度，纳米SiO2最适作用浓度为50μg/mL；ZnO纳米棒和纳米管最适作用浓度均为10μg/mL； 2.纳米材料转染组在转染后24h和48h均观测到绿色荧光蛋白的表达，表达率为5%，显著低于脂质体转染组。 3.成功克隆结核分枝杆菌保护性抗原TB10.4基因并构建真核表达重组质粒pEGFP-N1-TB10.4。结论：1.无机纳米颗粒的细胞毒性随着浓度的增加而升高，并与纳米颗粒的粒径、形状、分散性及表面修饰等物理化学性质有关； 2.3种无机纳米颗粒有介导基因转染细胞的功能，但转染效率不及脂质体； 3.成功构建重组质粒pEGFP-N1-TB10.4。
【关键词】：无机纳米 细胞毒性 转染 荧光表达 重组质粒
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R114
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-7
• 前言7-8
• 第一章 文献综述8-12
• 1.1 纳米材料概述8
• 1.2 无机纳米材料在诊断中的应用8-9
• 1.3 无机纳米材料在治疗中的应用9-10
• 1.4 无机纳米材料在预防中的应用10
• 1.5 展望10-12
• 第二章 材料与方法12-24
• 2.1 材料12-15
• 2.2 方法15-24
• 第三章 结果与分析24-40
• 3.1 无机纳米颗粒细胞毒性的检测结果24-35
• 3.2 无机纳米颗粒运载 pEGFP-N1 质粒转染 RAW267.4 细胞35-36
• 3.3 结核保护性抗原基因 TB10.4 的克隆和真核表达载体的构建36-40
• 第四章 讨论40-42
• 第五章 结论42-43
• 参考文献43-48
• 作者简介48-49
• 致谢49

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 闫国和,粟永萍,王军平,汪代杰,艾国平,王锋超,冉新泽,程天民;重组真核表达载体pEGFP-N1/PDGF-A的构建及真皮干细胞的转染[J];第三军医大学学报;2005年20期

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本文编号：877832