NF-κB抑制剂PDTC对铀矿尘致巨噬细胞炎症反应的调控作用

发布时间：2017-09-19 16:05

  本文关键词：NF-κB抑制剂PDTC对铀矿尘致巨噬细胞炎症反应的调控作用

  更多相关文章： 铀矿尘 巨噬细胞 炎症 NF-κB

【摘要】：目的:探讨铀矿尘致RAW264.7炎症反应过程中NF-κB对TNF-α、IL-6、MCP-1、iNOS和NO的调节作用,分析核转录因子NF-κB在铀矿尘致肺部损伤机制中的作用,以及寻找抑制铀矿尘致肺纤维化的重要靶点。方法:采用MTT法检测不同浓度铀矿尘作用于RAW264.7细胞不同时间对细胞存活率的影响;Western Blot检测铀矿尘对细胞核内NF-κB p65蛋白及细胞浆内iNOS蛋白表达的影响;Q-PCR检测铀矿尘对RAW264.7细胞中TNF-α、IL-6、MCP-1、iNOS mRNA的影响;ELISA检测铀矿尘对RAW264.7细胞培养上清液中TNF-α、IL-6、MCP-1含量的影响;硝酸还原酶法检测铀矿尘对RAW264.7细胞培养上清液中NO含量的影响。结果:MTT结果显示0、15、30、60、120、240μg/cm2浓度铀矿尘分别作用于RAW264.7细胞12、24、48h后,RAW264.7细胞存活率呈作用剂量和作用时间依赖性下降。60μg/cm2铀矿尘作用于RAW264.7细胞后,细胞核内NF-κB p65蛋白表达水平随着铀矿尘作用时间的延长呈上升趋势,至12h时铀矿尘组NF-κB p65蛋白相对表达量是对照组的5.10倍;细胞内TNF-α、IL-6、MCP-1、iNOS mRNA的表达水平较对照组升高;细胞培养上清液中TNF-α、IL-6、MCP-1以及NO含量随着铀矿尘作用时间的延长呈上升趋势,至24h时铀矿尘组TNF-α、IL-6、MCP-1及NO表达量分别为(12827.78±518.77)pg/ml、(224.63±10.38)pg/ml、(4178.59±26.04)pg/ml、(202.30±10.62)μmol/L,均显著高于该时间点对照组的表达量;细胞浆内i NOS蛋白表达水平随着铀矿尘作用时间的延长呈上升趋势,至24h时铀矿尘组i NOS蛋白相对表达量是对照组的4.50倍。用25μmol/L PDTC干预后,细胞核内NF-κB p65蛋白表达水平与对照组接近,显著低于铀矿尘组的表达水平;细胞上清液中TNF-α、IL-6、NO含量明显低于铀矿尘组,与对照组表达量较接近;细胞上清液中MCP-1含量与铀矿尘比较差异无统计学意义,明显高于对照组的表达水平;细胞浆中iNOS蛋白表达水平与对照组接近,显著低于铀矿尘组的表达水平。结论:1.15-240μg/cm2铀矿尘可以抑制小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞增殖并诱导其NF-κB、TNF-α、IL-6、MCP-1、iNOS及NO表达升高;2.25μmol/L NF-κB抑制剂PDTC可以在一定程度上干预铀矿尘所致的巨噬细胞炎性损伤。
【关键词】：铀矿尘 巨噬细胞 炎症 NF-κB
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R135.2
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 第1章 前言12-16
• 第2章 材料与方法16-30
• 2.1 实验材料16-20
• 2.1.1 实验细胞及其培养、传代、冻存、复苏16
• 2.1.2 实验粉尘的配制及其分组16-17
• 2.1.3 主要试剂17-18
• 2.1.4 主要仪器18-19
• 2.1.5 主要试剂的配制19-20
• 2.2 实验方法20-29
• 2.2.1 MTT检测细胞存活率20
• 2.2.2 Western Blot法检测细胞浆iNOS蛋白和细胞核NF-κBp65蛋白的表达20-23
• 2.2.3 Q-PCR检测细胞内TNF-α、IL-6、MCP-1、iNOS mRNA的表达水平23-26
• 2.2.4 ELISA法检测细胞培养上清液中TNF-α、IL-6、MCP-1的表达水平26-28
• 2.2.5 硝酸还原酶法检测细胞培养上清液中NO的表达水平28-29
• 2.3 统计分析29-30
• 第3章 结果30-44
• 3.1 铀矿尘对RAW264.7 细胞存活率的影响30
• 3.2 铀矿尘对RAW264.7 细胞核内NF-κB p65蛋白表达的影响30-32
• 3.3 铀矿尘对RAW264.7 细胞TNF-α、IL-6、MCP-1、iNOS mRNA表达的影响32-34
• 3.3.1 铀矿尘对RAW264.7 细胞TNF-α mRNA表达的影响32
• 3.3.2 铀矿尘对RAW264.7 细胞IL-6 mRNA表达的影响32-33
• 3.3.3 铀矿尘对RAW264.7 细胞MCP-1 mRNA表达的影响33
• 3.3.4 铀矿尘对RAW264.7 细胞iNOS m RNA表达的影响33-34
• 3.4 铀矿尘对RAW264.7 细胞TNF-α、IL-6、MCP-1、iNOS蛋白表达的影响34-39
• 3.4.1 铀矿尘对RAW264.7 细胞上清液中TNF-α含量的影响34-35
• 3.4.2 铀矿尘对RAW264.7 细胞上清液中IL-6 含量的影响35-36
• 3.4.3 铀矿尘对RAW264.7 细胞上清液中MCP-1 含量的影响36-37
• 3.4.4 铀矿尘对RAW264.7 细胞浆内iNOS蛋白表达的影响37-39
• 3.5 铀矿尘对RAW264.7 细胞上清液中NO含量的影响39-40
• 3.6 NF-κB抑制剂（PDTC）对铀矿尘致RAW264.7 巨噬细胞炎症反应的调控作用40-44
• 3.6.1 PDTC对RAW264.7 细胞核内NF-κB p65蛋白表达的影响40
• 3.6.2 PDTC对RAW264.7 细胞上清液中TNF-α 含量的影响40-41
• 3.6.3 PDTC对RAW264.7 细胞上清液中IL-6 含量的影响41
• 3.6.4 PDTC对RAW264.7 细胞上清液中MCP-1 含量的影响41-42
• 3.6.5 PDTC对RAW264.7 细胞浆中iNOS蛋白表达的影响42-43
• 3.6.6 PDTC对RAW264.7 细胞上清液中NO含量的影响43-44
• 第4章 讨论44-50
• 4.1 铀矿尘对RAW264.7 细胞NF-κB表达的影响44-45
• 4.2 铀矿尘对RAW264.7 细胞炎症相关活性物质的影响45-47
• 4.3 PDTC对铀矿尘致RAW264.7 细胞炎症损伤的干预作用47-50
• 第5章 结论50-52
• 参考文献52-62
• 文献综述62-72
• 参考文献68-72
• 附录72-73
• 研究生学习期间发表的论文73-74
• 致谢74

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本文编号：882569