鹰嘴豆铁蛋白的制备及其补铁功效研究

发布时间：2017-09-27 18:12

  本文关键词：鹰嘴豆铁蛋白的制备及其补铁功效研究

  更多相关文章： 纯化 缺铁性贫血 铁蛋白 响应面 鹰嘴豆 正交实验

【摘要】：铁蛋白是一种由24个亚基组成的铁贮藏蛋白,其贮存的铁具有可溶、无毒和生物可给性等特点,广泛存在于动物、植物、微生物的体细胞中,具有调节生物体内铁的代谢平衡和解除亚铁离子毒性的双重作用。相对于动物铁蛋白,植物铁蛋白的研究较少,主要集中于豆科作物(大豆、豌豆、黄豆、蚕豆、黑豆、红小豆、羽扇豆等)及玉米、紫花苜蓿、南瓜种子、三叶草种子、芸豆叶等。 本课题以鹰嘴豆为原料,研究了缓冲液种类、缓冲液pH值、料液比、盐析盐种类、盐浓度等因素对鹰嘴豆铁蛋白提取率及总蛋白提取率的影响。根据Fe2+与邻菲咯琳络合后显示特殊的桔红色的反应原理,在还原剂连二亚硫酸钠存在的条件下,鹰嘴豆提取液中加入0.1%邻菲咯琳溶液后颜色变化确定是否含有铁蛋白,在510nm处测定吸光度值来进行定量分析Braford分光光度法测定蛋白含量。在单因素实验的基础上,利用L9(34)正交实验法及根据Box-Behnken原理采用三因素三水平的响应面分析法优化铁蛋白提取工艺,在料液比1：4,浓度为50mmol/L MgCl2盐析,KH2PO4-NaOH缓冲液pH7.5条件下,鹰嘴豆铁蛋白最优提取率为2.659×10-5。 鹰嘴豆经浸泡、匀浆、过滤后粗提液依次用MgCl2和柠檬酸三钠晶体进行盐析,高速离心得到粗提液经MWC03000透析后,用DEAE-Sepharose Fast Flow弱阴离子交换柱层析,大体积pH7.5,20mmol/L KH2PO4-NaOH缓冲液平衡柱子后,以含0.1-1.0mol/L NaCl的pH7.5,20mmol/L KH2PO4-NaOH缓冲液梯度洗脱,流速1.0mL/min,5mL/管收集洗脱峰。再用Sephacryl S-500凝胶过滤层析,洗脱液为pH7.5,20mmol/L KH2PO4-NaOH,0.3mol/L NaCl。以0.5mL/min流速洗脱后再以0.1mL/min流速细分离,得到电泳纯度的铁蛋白。Native-PAGE凝胶电泳测得鹰嘴豆铁蛋白的分子量约为560KDa, SDS-PAGE凝胶电泳测得鹰嘴豆铁蛋白含有一种分子量为27.9KDa的亚基。 除空白对照组外,饲喂4周龄健康断乳SPF级雌性wistar大鼠低铁饲料4周后,眼底静脉丛采血测定血红蛋白(Hb)含量,选择Hb低于90g/L的大鼠,根据体重和血红蛋白水平随机分为5组。除空白对照组,各组在恢复贫血实验期间继续给予低铁饲料和去离子水。空白对照组、贫血模型对照组每天灌胃给予去离子水,阳性对照组灌胃折合铁离子含量3mg/(kg· d)硫酸亚铁,高剂量组灌胃折合铁离子含量3mg/(kg· d)铁蛋白,中剂量组灌胃折合铁离子含量1.5mg/(kg·d)铁蛋白,低剂量组灌胃折合铁离子含量0.75mg/(kg· d)铁蛋白。处死大鼠后测定其各项血液学指标(血红蛋白、血清铁及红细胞数、红细胞体积、平均红细胞体积、平均血红蛋白含量等血常规)及肝、心、脾、肾重量,结果表明,补充鹰嘴豆铁蛋白可有效提高血清铁浓度,且增加RBC及HCT浓度,改善缺铁性贫血所致器官重量降低,有效改善缺铁性贫血。
【关键词】：纯化 缺铁性贫血 铁蛋白 响应面 鹰嘴豆 正交实验
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R151;R556.3
【目录】：

• 中文摘要5-6
• Abstract6-7
• 英文缩略词7-8
• 文献综述8-18
• 1 鹰嘴豆的概述8-10
• 1.1 鹰嘴豆的营养特点8-10
• 1.2 鹰嘴豆的应用10
• 2 铁的概述10-12
• 2.1 铁的生理功能10-11
• 2.2 铁的需求和来源11
• 2.3 铁缺乏及预防11-12
• 3 植物铁蛋白的概述12-18
• 3.1 植物铁蛋白的结构与功能12-14
• 3.2 植物铁蛋白基因的克隆、表达调控及转化14
• 3.3 植物铁蛋白的分离纯化14-15
• 3.4 植物铁蛋白铁氧化沉淀与还原释放15-16
• 3.5 植物铁蛋白营养及应用16-18
• 前言18-19
• 第一章 鹰嘴豆铁蛋白提取工艺优化研究19-31
• 1 材料和方法19-21
• 1.1 实验材料和设备19-20
• 1.2 实验方法20-21
• 2 结果21-30
• 2.1 线性关系及回归方程22
• 2.2 单因素实验22-24
• 2.3 正交实验24-27
• 2.4 响应面实验27-30
• 3 讨论30-31
• 第二章 鹰嘴豆铁蛋白纯化及表征31-41
• 1 材料和方法31-34
• 1.1 实验材料和设备31-32
• 1.2 实验方法32-34
• 2 结果34-40
• 2.1 离子交换柱层析34-37
• 2.2 凝胶过滤柱层析37-38
• 2.3 凝胶电泳38-40
• 3 讨论40-41
• 第三章 鹰嘴豆粗铁蛋白补铁功效研究41-46
• 1 材料和方法41-42
• 1.1 实验材料和设备41
• 1.2 实验方法41-42
• 2 结果42-44
• 2.1 缺铁性贫血大鼠模型的建立42
• 2.2 粗铁蛋白对缺铁性贫血大鼠体重的影响42-43
• 2.3 粗铁蛋白对缺铁性贫血大鼠血红蛋白含量的影响43
• 2.4 粗铁蛋白对缺铁性贫血大鼠血清铁含量的影响43
• 2.5 粗铁蛋白对缺铁性贫血大鼠血液学的影响43-44
• 2.6 粗铁蛋白对缺铁性贫血大鼠器官的影响44
• 3 讨论44-46
• 结论46-47
• 参考文献47-55
• 致谢55-56
• 个人简历56

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 金亚波;韦建玉;王军;;植物铁营养研究进展Ⅰ:生理生化[J];安徽农业科学;2007年32期

2 黄河清,张凤章,林庆梅,曾润颖,邱雪慧,许良树;马脾铁蛋白释放铁的反应级数和速率相数的转换[J];动物学报;1999年02期

3 包兴国;杨蕊菊;舒秋萍;;鹰嘴豆的综合开发与利用[J];草业科学;2006年10期

4 陈丽萍;张丽静;傅华;;植物铁蛋白的研究进展[J];草业学报;2010年06期

5 王彩芬;;植物铁结合蛋白基因及在水稻中的转化研究进展[J];中国稻米;2007年03期

6 颜利,黄河清,金宏伟,陈平,杨天赐,王群力;MALDI-TOF质谱和电子光谱技术研究人血清铁蛋白释放铁的动力学[J];高等学校化学学报;2004年10期

7 胡菊;廖夏云;邓建军;胡小松;赵广华;;黄豆铁蛋白提取新方法及其与豌豆铁蛋白活性比较[J];高等学校化学学报;2009年10期

8 房sリ，

本文编号：931161