出生前DEHP暴露对大鼠下丘脑及生殖腺GnRH及GnRHR表达的影响

发布时间：2017-10-09 09:10

  本文关键词：出生前DEHP暴露对大鼠下丘脑及生殖腺GnRH及GnRHR表达的影响

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【摘要】：目的探讨出生前暴露于邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)对子代雌雄鼠生殖神经内分泌系统的影响及其作用机制。方法将成功受孕的32只孕鼠随机分为溶剂对照组(玉米油)以及2 mg/kg、10 mg/kg、50 mg/kg DEHP三个剂量组,每组8只。自G14~G19进行连续灌胃染毒。随机选取48只子代新生鼠,于出生后24小时内称重、断头处死后取下丘脑,提取RNA。其余子代大鼠继续饲养至出生后第21天断乳,断乳后雌雄鼠分笼饲养。子代鼠饲养至约70日龄时,从每窝中随机选择雌雄鼠各1只、每组雌雄鼠各8只,将动情间期的雌鼠和雄鼠断头处死,取下丘脑及卵巢、睾丸,随后提取RNA并进行逆转录。另外,再随机选取子代70日龄雌雄大鼠共48只,雌雄各半,每组6只,心脏灌注多聚甲醛后取下丘脑行组织切片。对新生鼠下丘脑、成年雌雄大鼠下丘脑和生殖腺GnRH及GnRHR基因进行实时荧光定量PCR检测,以及使用免疫荧光法检测成年雌雄大鼠下丘脑GnRH十肽表达情况。结果(1)方差分析结果显示,与对照组相比,新生雌鼠下丘脑GnRH及Gn RHR基因相对表达水平在各组间的改变无统计学意义(P0.05);新生雄鼠下丘脑GnRH基因相对表达水平在各个处理组间的差异无统计学意义(P0.05),而新生雄鼠下丘脑GnRHR基因在2 mg/kg、10 mg/kg剂量组GnRHR基因相对表达水平升高,与对照组比较差异具有统计学意义((P0.05);(2)统计分析结果显示,子代雌性大鼠下丘脑POA区GnRH及GnRHR基因相对表达水平在各处理组的差异无统计学意义(P0.05);子代雄性大鼠下丘脑GnRHR基因相对表达水平具有统计学意义,与对照组相比,2mg/kg、10 mg/kg、50 mg/kg三个剂量组的子代雄性大鼠下丘脑GnRHR基因相对表达水平均有下降((P0.05);(3)子代成年雌鼠及雄鼠下丘脑GnRH肽的平均光密度在各组间的差异无统计学意义(P0.05);(4)2 mg/kg DEHP处理组的子代成年雌鼠卵巢GnRH基因相对表达水平升高,与对照组相比差异有统计学意义((P0.05),而GnRHR基因相对表达水平组间差异无统计学意义(P0.05);子代成年雄鼠睾丸GnRH及GnRHR基因相对表达水平组间差异无统计学意义(P0.05)。结论(1)在本研究条件下,未发现出生前各剂量DEHP暴露影响子代新生鼠及成年鼠下丘脑GnRH基因表达,也未发现其影响成年鼠下丘脑GnRH肽的表达;在HPG轴的下丘脑水平,出生前短期低剂量DEHP暴露上调了新生雄鼠、下调了成年雄鼠的GnRHR基因表达水平,对雄性的生殖健康存在潜在影响;(2)本实验染毒剂量下,出生前DEHP暴露对子代大鼠的影响存在性别差异性;(3)出生前DEHP暴露对成年子代雌鼠卵巢的作用可能存在低剂量效应,但未影响雄鼠睾丸;相关机制尚需进一步研究。
【关键词】：邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯 出生前暴露 促性腺激素释放激素 促性腺激素释放激素受体 环境内分泌干扰物
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R114
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-11
• 前言11-15
• 研究背景及现状11-14
• 研究目的、方法14-15
• 材料和方法15-23
• 1.1 材料15-16
• 1.1.1 实验动物15
• 1.1.2 主要药品与试剂15
• 1.1.3 主要仪器与设备15-16
• 1.1.4 试剂配制16
• 1.2 实验方法16-23
• 1.2.1 实验动物分组与处理16-17
• 1.2.2 子代鼠下丘脑及生殖腺GnRH及Gn RHR基因表达水平测定17-21
• 1.2.3 成年后子代大鼠下丘脑ME区GnRH肽表达水平测定21-22
• 1.2.4 统计学分析22-23
• 结果23-31
• 2.1 子代新生鼠下丘脑GnRH及GnRHR基因相对表达情况23-25
• 2.1.1 子代雌性新生鼠下丘脑GnRH及Gn RHR基因相对表达情况23-24
• 2.1.2 子代雄性新生鼠下丘脑GnRH及Gn RHR基因相对表达情况24-25
• 2.2 成年子代大鼠下丘脑POA区GnRH及GnRHR基因相对表达情况25-27
• 2.2.1 成年子代雌鼠下丘脑POA区GnRH及GnRHR基因相对表达情况25-26
• 2.2.2 成年子代雄鼠下丘脑POA区GnRH及GnRHR基因相对表达情况26-27
• 2.3 成年子代大鼠下丘脑GnRH肽表达情况27-28
• 2.4 成年子代大鼠生殖腺GnRH及GnRHR基因相对表达情况28-31
• 2.4.1 成年子代雌鼠卵巢GnRH及GnRHR基因相对表达情况28-29
• 2.4.2 成年子代雄鼠睾丸GnRH及GnRHR基因相对表达情况29-31
• 讨论31-40
• 3.1 出生前DEHP暴露对子代新生鼠下丘脑GnRH及GnRHR基因表达的影响32-33
• 3.2 出生前DEHP暴露对成年子代大鼠下丘脑GnRH、GnRHR基因及GnRH肽表达的影响33-37
• 3.3 出生前DEHP暴露对子代成年大鼠生殖腺GnRH及GnRHR基因表达的影响37-38
• 3.4 出生前DEHP暴露对子代大鼠GnRH及GnRHR基因表达影响的性别差异性38
• 3.5 出生前DEHP暴露的低剂量-非线性效应38-40
• 结论40-41
• 参考文献41-54
• 发表论文和参加科研情况说明54-55
• 综述55-69
• 综述参考文献61-69
• 致谢69-71
• 个人简历71

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本文编号：999329