氰化物代谢物在健康人群体内含量的参考值范围研究

发布时间：2020-11-05 23:26

　　目的:1.建立液液萃取,离子色谱电导检测法检测生物样品中硫氰酸根的方法;2.建立液液萃取,LC-MS/MS法检测生物样品中2-氨基噻唑啉-4-羧酸(ATCA)的方法;3.制定健康人群体内硫氰酸根(SCN~-)及2-氨基噻唑啉-4-羧酸(ATCA)含量的参考值范围。方法:1.受试者志愿者124名(男性45人,女性79人),年龄18-27周岁。所有参与者无吸烟嗜好,无心、肝、肺、肾脏疾病史等其他慢性病,并签署知情同意书。2.标本采集志愿者早晨空腹状态下,从肘静脉采血20m L,分装于血清、血浆、全血等不同采血管中。血清、血浆组凝血后,5000r/min离心5min,取上清后分装在冻存管中,放入-80℃冰箱保存以待检测。中毒案例样品6例,检材为全血,来源于山西医科大学司法鉴定中心和北京市公安局。3.提取检测待检生物样品经液液萃取,离子色谱电导检测器检测硫氰酸根(SCN~-),利用保留时间以及样品添加实验进行定性,通过标准曲线(外标法)定量志愿者体内硫氰酸根含量。待检生物样品添加内标(ATCA-13C,15N2),经液液萃取,LC-MS/MS检测,MRM模式扫描,利用保留时间、定量离子与定性离子对比例定性,标准曲线(内标法)定量志愿者体内2-氨基噻唑啉-4-羧酸(ATCA)含量。4.数据处理数据用SPSS 20.0进行秩和检验。P0.05时,认为有统计学差异。结果:1.样品中硫氰酸根在125ng/m L到5000ng/m L之间线性范围良好,相关系数R2为0.9999,最低检出限20.0ng/mL,最低定量下限40.7ng/m L,日间和日内精密度均小于10%。45例健康男性血清中硫氰酸根含量374.8±209.6ng/m L,范围64.1ng/m L-943.4ng/mL;75例健康女性血清中硫氰酸根含量395.8±145.9ng/mL,范围109.7ng/mL-807.5ng/mL,性别间无统计学差异。45例健康男性血浆中硫氰酸根含量261.6±146.7ng/mL,范围53.5ng/mL-681.6ng/m L;78例健康女性血浆中硫氰酸根含量273.7±114.9ng/m L,范围62.4ng/mL-557.3ng/mL,性别间无统计学差异。43例健康男性全血中硫氰酸根含量208.0±131.4ng/m L,范围40.7ng/mL-548.9ng/mL;79例健康女性全血中硫氰酸根含量222.7±105.3ng/m L,范围72.5ng/mL-539.8ng/mL,性别间无统计学差异。2.样品中2-氨基噻唑啉-4-羧酸(ATCA)在12.5ng/m L到1000.0ng/m L之间线性范围良好,相关系数R2为0.9999,最低检出限1.0ng/m L,最低定量下限5.0ng/mL,日间和日内精密度均小于10%。44例健康男性血清中2-氨基噻唑啉-4-羧酸(ATCA)含量238.4±82.5ng/m L,范围101.6ng/mL-385.1ng/m L;76例健康女性血清中2-氨基噻唑啉-4-羧酸(ATCA)含量215.3±86.4ng/mL,范围86.8ng/mL-381.0ng/mL,性别间无统计学差异。45例健康男性血浆中2-氨基噻唑啉-4-羧酸(ATCA)含量236.1±85.4ng/m L,范围81.4ng/m L-440.0ng/m L;79例健康女性血浆中2-氨基噻唑啉-4-羧酸(ATCA)含量200.1±96.3ng/mL,范围81.6ng/mL-387.7ng/mL,性别间无统计学差异。44例健康男性全血中2-氨基噻唑啉-4-羧酸(ATCA)含量73.7±35.4ng/m L,范围22.6ng/mL-163.1ng/m L;79例健康女性全血中2-氨基噻唑啉-4-羧酸(ATCA)含量77.1±38.2ng/mL,范围25.5ng/mL-177.0ng/mL,性别间无统计学差异。3.6例中毒案件硫氰酸根含量4872.0±4198.0ng/mL,范围1166.0ng/mL-11966.0ng/m L。2-氨基噻唑啉-4-羧酸(ATCA)含量1026.0±1169.0ng/m L,范围318.0ng/m L-3396.0ng/m L。结论:1.离子色谱电导检测法可用于检测血清、血浆、全血中硫氰酸根含量。该方法操作简便,回收率高、专属性强、灵敏度高、准确度高,可满足正常人群及中毒人群体内硫氰酸根的定性、定量检测。统计学比较显示,血清中硫氰酸根中含量大于血浆中硫氰酸根含量,血浆中硫氰酸根含量大于全血中的硫氰酸根含量。健康人群血清中硫氰酸根参考值范围64.1ng/m L-943.4ng/m L,95%参考值上限775.2ng/mL;血浆中硫氰酸根参考值范围53.5ng/m L-681.6ng/m L,95%参考值上限513.1ng/m L;全血中硫氰酸根参考值范围40.7-548.9ng/m L,95%参考值上限457.9ng/mL。2.LC-MS/MS法可用于检测生物样品中2-氨基噻唑啉-4-羧酸(ATCA),利用保留时间及定量离子与定性离子对比例定性,利用内标物与目标物峰面积比值,内标法和工作曲线法定量。方法回收率高、专属性强、特异性高、内源性物质对目标物检测干扰小,方法灵敏度高、准确度高,可满足正常人群及中毒人群体内2-氨基噻唑啉-4-羧酸(ATCA)的定性、定量要求。统计学比较显示,血清和血浆中2-氨基噻唑啉-4-羧酸(ATCA)含量没有统计学差异,但均明显高于全血中2-氨基噻唑啉-4-羧酸含量。血清中2-氨基噻唑啉-4-羧酸(ATCA)的参考范围86.8ng/mL-385.1ng/mL,95%的参考值上限366.3ng/mL,血浆中2-氨基噻唑啉-4-羧酸(ATCA)的参考范围81.4ng/m L-440.0ng/m L,95%的参考值上限375.7ng/m L;全血中2-氨基噻唑啉-4-羧酸(ATCA)的参考范围22.6ng/m L-177.0ng/m L,95%的参考值上限154.5ng/m L。3.本次研究建立了血清、血浆、全血中氰化物两种代谢物的检测方法,均满足正常人群及中毒人群体内含量检测。针对正常人群分别制定了各自对应的参考值范围,为法医学鉴定中氰化物中毒案件提供一定的参考。
【学位单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：D919
【文章目录】：
摘要
Abstract
常用缩写词中英文对照表
前言
第一部分生物样品中硫氰酸根（SCN-）的离子色谱电导检测方法
    1 材料与方法
        1.1 仪器
        1.2 试剂
        1.3 标准溶液的配制
        1.4 仪器方法
        1.5 样品的制备
    2 结果
        2.1 离子色谱图
        2.2 线性范围与最低检出限
        2.3 精密度与准确度
    3 讨论
    4 结论
第二部分生物样品中2-氨基噻唑啉-4-羧酸（ATCA）LC-MS/MS检测方法
    1 材料与方法
        1.1 仪器
        1.2 试剂
        1.3 标准品溶液配制
        1.4 色谱条件
        1.5 质谱条件
        1.6 样品制备和提取
    2 结果
        2.1 标准品色谱图及质谱图
        2.2 样品色谱图及质谱图
        2.3 工作曲线
        2.4 精密度与准确度
    3 讨论
    4 结论
第三部分健康人群中硫氰酸根（SCN-）与2-氨基噻唑啉-4-羧酸（ATCA）的检测
    1 材料与方法
        1.1 仪器
        1.2 试剂
        1.3 标准溶液的配制
        1.4 仪器的方法
        1.5 样品的采集
        1.6 样品的前处理
    2 结果
        2.1 样品中的硫氰酸根的离子色谱图
        2.2 志愿者体内硫氰酸根的含量的检测
        2.3 样品中2-氨基噻唑啉-4-羧酸（ATCA）的MRM色谱图及质谱图
        2.4 志愿者体内2-氨基噻唑啉-4-羧酸（ATCA）的含量的检测
    3 讨论
    4 结论
第四部分中毒人群中硫氰酸根（SCN-）与2-氨基噻唑啉-4-羧酸（ATCA）的检测
    1 材料与方法
        1.1 仪器
        1.2 试剂
        1.3 标准溶液的而配制
        1.4 仪器的方法
        1.5 样品的采集
        1.6 样品的前处理
    2 结果
        2.1 样品中的硫氰酸根的离子色谱图
        2.2 样品中2-氨基噻唑啉-4-羧酸（ATCA）的MRM色谱图及质谱图
        2.3 案件中的硫氰酸根及2-氨基噻唑啉-4-羧酸的检测结果
    3 讨论
    4 结论
参考文献
综述
    参考文献
致谢
个人简历

【参考文献】

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