HRM技术在法医疑难生物性检材遗传标记分析中的应用

发布时间：2023-02-14 19:50

　　目的:高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)分析技术是一种利用DNA杂交与退火熔解特性进行核酸分析的技术,主要通过对DNA解离活动中荧光染料变化的监控,实现突变的筛查和检测。HRM分析技术不需要探针标记,并且能够在很大程度上减少测序的负担,具有特异性好、通量高、时间成本低、便于操作等优点。HRM分析技术还是一种同质闭管的检测方法,聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)与后续检测均在同一孔内完成,无需转移样品,能有效地减少交叉污染的可能性。近年来越来越多的专家学者尝试将HRM分析技术应用于法医学研究和相关案例中。本研究拟采用HRM分析方法,对微量或降解检材进行遗传标记分析,以期应用于法医学个体识别案件中。降解和低拷贝数(low-copy-number,LCN)的DNA样品是法医学相关案件中常见的检材,具有一定程度的挑战性,因为它们增加了样品处理的难度,并降低了从DNA获得遗传信息的可能性。HRM分析技术可用于遗传标记的基因分型,且在法医学领域已被尝试用于检测LCN和降解的DNA。但是,基于HRM技术对降解和LCN ...

【文章页数】：63 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 :HRM分析技术在ABO基因分型中的应用
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料与试剂
            2.1.1 实验样品
            2.1.2 主要试剂与耗材
            2.1.3 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 基因组DNA分离和处理
            2.2.2 引物设计与HRM扩增
            2.2.3 HRM分析进行ABO基因分型
            2.2.4 多重PCR扩增子熔解曲线分析
    3 结果
        3.1 应用HRM技术成功对常见ABO基因型进行分型
            3.1.1 子集1分型结果
            3.1.2 子集2分型结果
        3.2 应用HRM技术成功对双重PCR产物进行基因分型
    4 讨论
    5 结论
第二部分 :HRM技术在微量和降解检材基因分型中的应用
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料与试剂
            2.1.1 实验样品
            2.1.2 主要试剂与耗材
            2.1.3 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 DNA样品的制备和处理
            2.2.2 引物设计与HRM条件
            2.2.3 应用HRM分析进行基因分型
    3 结果
        3.1 HRM分析技术可对LCN DNA进行基因分型
        3.2 HRM分析技术可对降解DNA进行基因分型
        3.3 HRM分析技术可选择性应用于毛干DNA遗传标记的检测
    4 讨论
        4.1 HRM技术的特点与优势
        4.2 HRM技术的局限性
        4.3 HRM技术在LCN样品与降解检材中的应用
    5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：3742908