运动对大鼠生殖细胞凋亡及解偶联蛋白2表达的影响

发布时间：2017-05-26 18:16

  本文关键词：运动对大鼠生殖细胞凋亡及解偶联蛋白2表达的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：本研究通过10周的60min、120min游泳训练,观察长期不同运动量训练后大鼠睾丸组织UCP2的表达变化和运动对自由基代谢的影响,探讨不同负荷游泳运动对大鼠生殖机能的影响及相关机理。 方法：随机选取雄性SD大鼠24只,随机分成安静对照组(C组)、60min运动组(E60组)、120min运动组(E120组),每组8只。(1)C组不运动,正常饲养；(2)E60组和E120组大鼠采用无负重游泳训练共10周。实验结束后,检测血清SOD、MDA、NO指标的变化,HE染色观察睾丸组织形态学结构,用TUNEL法检测睾丸生殖细胞凋亡,流式细胞仪检测精子凋亡百分比,PCR检测Cyt C及UCP2mRNA表达变化。 结果：1.训练前各组大鼠间体重差异不显著,经过10周的训练后,两组大鼠体重都极显著低于对照组,但增长率仅有E120组极显著低于对照组,E60组的增长率与c组差异不显著,E120组与E60组之间差异也不显著。2.HE染色观察到C组大鼠睾丸生精小管正常,E60组间隙变宽,管中可见成熟精子,E120组睾丸生精上皮破坏,支持细胞间紧密连接明显消失。TUNEL检测发现,E120组凋亡明显高于C组、E60组。3.精子总数E120组显著低于C组,E60组与C组、E120组无显著性差异,精子畸形率E120组显著高于C组和E60组,精子活动率各组间无显著性差异。4.GnRH浓度E60组显著高于C组,E120组显著低于对照组,极显著低于E60组。FSH、LH、血清T浓度,E60组极显著高于对照组,E120组显著低于对照组,极显著低于E60组。组织中的T浓度,E120组显著低于C组。5.大鼠血清中SOD活性,E60组显著高于C组,E120组极显著低于C组和E60组。MDA浓度,E60组显著低于C组,E120组极显著高于C组和E60组。NO浓度,E60组显著高于C组,E120组极显著高于C组,显著高于E60组。6.Cyt C基因在睾丸组织中,E60组显著低于C组,E120组极显著高于C组和E60组。UCP2基因在睾丸组织中E120组极显著高于c组,显著高于E60组。 结论：1.长时间大运动量运动比有氧运动睾丸生殖细胞凋亡率增加,提示生殖细胞凋亡增加可能是大运动量运动使生殖功能下降的生理机制；2.长期的适宜的强度引起抗氧化酶的适应性改变,提高了机体的抗氧化能力,也有利于机体功能的改善；3.大运动量运动上调UCP2参与调控活性氧,并保护机体免受细胞活性氧的氧化损伤,从而减少细胞凋亡。
【关键词】：运动 生殖机能 细胞凋亡 UCP2 Cyt C
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：G804.7;R87
【目录】：

• 中文摘要2-3
• Abstract3-8
• 缩语表8-9
• 一、文献综述9-21
• 1. 概述9
• 2 解偶联蛋白2(UNCOUPLINGPROTEIN2,UCP2)的研究进展9-11
• 2.1 UCP2的结构与分布9
• 2.2 UCP2的功能与调节9-10
• 2.3 UCP2与细胞凋亡10-11
• 2.4 运动对UCP2的影响11
• 3 细胞色素C(CYT C)概述11-13
• 3.1 Cyt C的结构与分布11-12
• 3.2 Cyt C的功能与调节12
• 3.3 Cyt C与细胞凋亡12
• 3.4 运动对Cyt C的影响12-13
• 4 运动与生殖机能13-16
• 4.1 性激素与生殖机能13-14
• 4.1.1 促性腺激素释放激素(GnRH)13
• 4.1.2 黄体生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH)13-14
• 4.1.3 睾酮(T)14
• 4.2 运动对性激素调节的影响14-16
• 4.2.1 运动与GnRH14-15
• 4.2.2 运动与LH、FSH15
• 4.2.3 运动与T15-16
• 4.3 运动对生殖机能的影响16
• 5. 精子细胞凋亡与生殖机能16-19
• 5.1 细胞凋亡概述16-17
• 5.2 精子细胞凋亡与生殖机能17
• 5.3 精子细胞凋亡的发生机理17-18
• 5.4 运动对细胞凋亡的影响18-19
• 5.4.1 中小强度有氧运动下的细胞凋亡18
• 5.4.2 大强度运动下的细胞凋亡18-19
• 6 研究展望19-21
• 二、实验部分21-39
• 1. 实验材料与方法21-26
• 1.1 实验对象21
• 1.2 实验分组21
• 1.3 运动环境及运动量的控制21
• 1.4 实验取材和样本处理21-22
• 1.4.1 血清制备21
• 1.4.2 睾丸匀浆制备21-22
• 1.4.3 精子悬液制备22
• 1.5 指标检测22-25
• 1.5.1 血液指标的测定22
• 1.5.2 睾丸组织指标的测定22
• 1.5.3 精子活率的测定22
• 1.5.4 精子畸形率22
• 1.5.5 精子计数22-23
• 1.5.6 睾丸组织HE染色23
• 1.5.7 原位缺口末端标记法检测生精细胞凋亡23
• 1.5.8 Annexin V/PI染色结合流式细胞技术检测精子凋亡的测定23-24
• 1.5.9 大鼠睾丸组织Cyt C、UcP2mRNA表达检测24-25
• 1.5.9.1 组织总RNA的提取24
• 1.5.9.2 RNA甲醛变性电泳检测24-25
• 1.5.9.3 cDNA的合成25
• 1.5.9.4 荧光定量引物设计与合成25
• 1.5.9.5 RT-PCR反应25
• 1.6 主要仪器及试剂25-26
• 1.7 数据处理26
• 2. 实验结果26-35
• 2.1 实验大鼠行为表现26
• 2.2 实验大鼠体重26-27
• 2.3 实验大鼠精子质量27-28
• 2.4 实验大鼠睾丸组织形态学结构28
• 2.5 实验大鼠生殖细胞凋亡28-31
• 2.5.1 原位缺口末端标记法检测生精细胞凋亡28-29
• 2.5.2 流式细胞技术检测精子凋亡29-31
• 2.6 实验大鼠血清GnRH、FSH、LH含量31
• 2.7 实验大鼠睾丸组织、血清T含量31-32
• 2.8 实验大鼠血清SOD活性和MDA、NO含量32-33
• 2.9 大鼠睾丸组织中Cyt C和UCP2的表达33-35
• 2.9.1 RNA提取结果33
• 2.9.2 荧光定量PCR的扩增曲线和熔解曲线33-34
• 2.9.3 目的基因在睾丸中表达量分析34-35
• 3. 讨论35-38
• 3.1 不同负荷运动对大鼠睾丸组织形态结构及精子活力等影响35
• 3.2 不同负荷运动对大鼠精子凋亡的影响35-36
• 3.3 不同负荷运动对性激素调节的影响36
• 3.4 不同负荷运动对抗氧化能力的影响36-37
• 3.5 不同负荷运动对UCP及Cyt C表达的影响37-38
• 3.6 不同负荷运动影响大鼠生殖机能及精子细胞凋亡的相关机理38
• 4. 结论38-39
• 参考文献39-44
• 致谢44-45
• 攻读学位期间发表的学术论文45-46

【参考文献】

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本文编号：397704