抗肿瘤活性物质的筛选及其抗肿瘤机制的研究

发布时间：2017-03-23 05:17

  本文关键词：抗肿瘤活性物质的筛选及其抗肿瘤机制的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：建立一个抗肿瘤物质筛选的方法,对来自于中药的提取样品进行筛选,以期获得具有抗肿瘤活性的化合物；并进一步研究具有抗肿瘤活性的化合物的抑瘤作用机制,为开发新的抗肿瘤药物奠定基础。方法：MTT比色法检测不同浓度(100μg/mL、50μg/mL、2μg/mL、0.4μg/mL 0.08μg/mL、0.16μg/mL)顺铂作用24h对人肝癌细胞SNU-387、人骨肉瘤细胞MG-63的影响,计算出不同浓度对应的抑制率,求出半数抑制浓度IC50；以顺铂为参照,选取高浓度501μg/mL作为筛选的初步浓度,分别对苍术苷、白头翁皂苷(BTW)系列化合物、紫草(ZC)系列化合物、麦冬(MD)系列化合物和灵芝三萜(LZ)系列化合物2种细胞进行筛选。通过顺铂进行对比,选出抑制作用较为明显的药物进行进一步筛选,分别计算出半数抑制浓度IC50；最终选择了4种药物(ZC-17、MD-4、BTW10、BTW11)采用Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞仪进行细胞凋亡检测,药物分别浓度为50μg/mL、10μg/mL、2μg/mL,作用时间24h；通过Elisa法检测4种药物不同浓度(50μg/mL、0μg/mL、2μg/mL)对bax与bcl-2蛋白表达的影响。结果：顺铂能有效抑制人肝癌细胞SNU-387、人骨肉瘤细胞MG-63的生长,24h半数抑制浓度IC50分别为6.391μg/mL、16.592μg/mL,浓度达到50μg/mL抑制率均在90%附近；除灵芝三萜(LZ)系列化合物、苍术苷外,其他3类样品(白头翁皂苷(BTW)系列化合物、紫草(ZC)系列化合物、麦冬(MD)系列化合物)中均发现有高活性的物质。其中ZC-17、MD-4、BTW10μBTW11对于人肝癌细胞SNU-387半数抑制浓度IC50分别为10.86μg/mL、3.097μg/mL、1.633μg/mL,3.104μg/mL,ZC-17、MD-4对人骨肉瘤细胞MG-63半数抑制浓度IC50分别为5.465μg/mL、2.639μg/mL;通过流式结果,对比阳性组(顺铂)和阴性组(DMSO)发现4种物质(ZC-17?MD-4/BTW10/BTW11)均可以促进人肝癌细胞SNU-387凋亡,凋亡率与药物浓度相关,BTW11高浓度组诱导凋亡明显。2种物质(ZC-17、MD-4)均可促进人骨肉瘤细胞MG-63凋亡MD-4在高剂量下坏死偏多；与对照组相比,发现阳性组和3种药物(ZC-17、BTW10、 BTW11)可上调人肝癌细胞SNU-387中bax的蛋白表达量,下调bcl-2的蛋白表达量。同时ZC.17可上调人骨肉瘤细胞MG-63中bax的蛋白表达量,下调bcl-2的蛋白表达量。结论：4种物质(ZC-17、MD-4、BTW10、BTW11)均能明显抑制肿瘤生长,且与浓度成一定关系；4种物质(ZC-17、MD-4、BTW10、BTW11)均能诱导人肝癌细胞SNU-387凋亡,2种物质(ZC-17、MD-4)均能诱导人骨肉瘤细胞MG-63凋亡；通过对细胞凋亡蛋白bax与bcl-2的检测,证明ZC-17、BTW10、BTW11诱导细胞凋亡可能是通过上调Bax、下调Bcl-2,MD-4诱导细胞凋亡可能是其他途径。
【关键词】：抗肿瘤筛选 细胞凋亡 Bcl-2 Bax
【学位授予单位】：西南交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R96
【目录】：

• 摘要7-9
• 英文摘要9-15
• 第一章 绪论15-30
• 1.1 肿瘤的概述15
• 1.2 人肝癌和人骨肉瘤简介15-16
• 1.2.1 肝癌的现状15-16
• 1.2.2 骨肉瘤简介16
• 1.3 植物来源抗肿瘤药物的研究介绍16-22
• 1.3.1 紫杉醇研究简述17-18
• 1.3.2 喜树碱研究简述18
• 1.3.3 长春碱研究简述18-19
• 1.3.4 其他相关抗肿瘤药19-22
• 1.3.4.1 白头翁提取物19-20
• 1.3.4.2 麦冬提取物20
• 1.3.4.3 紫草提取物20-21
• 1.3.4.4 灵芝提取物21
• 1.3.4.5 苍术苷21-22
• 1.4 药物筛选介绍22-23
• 1.5 细胞凋亡机制23-28
• 1.5.1 细胞的凋亡与坏死23
• 1.5.2 凋亡的相关蛋白23-25
• 1.5.2.1 caspase与细胞凋亡23-24
• 1.5.2.2 Bcl-2家族与细胞凋亡24-25
• 1.5.2.3 细胞色素C与细胞凋亡25
• 1.5.3 细胞凋亡通路25-28
• 1.5.3.1 细胞凋亡外源性通路25-26
• 1.5.3.2 细胞凋亡内源性通路26-28
• 1.6 课题研究背景28-30
• 1.6.1 研究意义28-29
• 1.6.2 研究的技术路线29-30
• 第二章 抗肿瘤药物模型的建立30-42
• 2.1 实验材料及仪器30-31
• 2.1.1 实验细胞来源30
• 2.1.2 实验仪器及试剂30-31
• 2.2 实验所用相关方法31
• 2.3 相关实验准备31-32
• 2.3.1 细胞培养液的配制31-32
• 2.3.2 PBS缓冲液的配制32
• 2.3.3 MTT的配制32
• 2.3.4 相关样品溶液的处理32
• 2.4 对SNU-387和MG-63生长曲线进行测定32-35
• 2.4.1 细胞复苏33
• 2.4.2 细胞传代33
• 2.4.3 细胞计数33-34
• 2.4.4 MTT法测定SNU-387、MG-63细胞的生长曲线34-35
• 2.4.4.1 实验步骤34
• 2.4.4.2 实验结果与分析34-35
• 2.5 观察不同浓度顺铂对SNU-387和MG-63生长抑制作用35-42
• 2.5.1 实验方法35
• 2.5.2 统计学分析35
• 2.5.3 结果与讨论35-42
• 2.5.3.1 用MTT法测定顺铂对SNU-387、MG-63的影响35-41
• 2.5.3.2 小结与讨论41-42
• 第三章 样品筛选42-71
• 3.1 实验材料42
• 3.1.1 实验药物及细胞42
• 3.1.2 主要试剂42
• 3.2 实验方法42-43
• 3.2.1 实验步骤42-43
• 3.2.2 统计学分析43
• 3.3 初步筛选43-65
• 3.3.1 苍术苷筛选43-44
• 3.3.2 BTW系列化合物初筛44-47
• 3.3.3 ZC系列化合物初筛47-52
• 3.3.3.1 ZC系列化合物初筛-SNU-38747-50
• 3.3.3.2 ZC系列化合物初筛-MG-6350-52
• 3.3.4 MD系列化合物初筛52-60
• 3.3.4.1 MD系列化合物初筛-SNU-38752-56
• 3.3.4.2 MD系列化合物初筛-MG-6356-60
• 3.3.5 LZ三萜系列化合物初筛60-64
• 3.3.5.1 LZ三萜系列化合物初筛-SNU-38760-62
• 3.3.5.2 LZ三萜系列化合物初筛-MG-6362-64
• 3.3.6 小结64-65
• 3.4 第二次筛选65-69
• 3.4.1 BTW系列化合物筛选65-66
• 3.4.2 ZC系列化合物筛选66-67
• 3.4.3 MD系列化合物筛选67-68
• 3.4.4 小结68-69
• 3.5 讨论69-71
• 第四章 流式细胞术进行细胞凋亡检测71-82
• 4.1 实验材料及仪器71-74
• 4.1.1 实验细胞来源71
• 4.1.2 实验样品71-73
• 4.1.3 实验仪器及试剂73-74
• 4.2 实验所用相关方法74
• 4.3 实验步骤74-75
• 4.4 实验结果75-80
• 4.4.1 BTW系列化合物凋亡检测75-77
• 4.4.2 ZC-17诱导细胞凋亡检测77-78
• 4.4.2.1 ZC-17对SNU-387的凋亡影响77
• 4.4.2.2 ZC-17对MG-63的凋亡影响77-78
• 4.4.3 MD-4诱导细胞凋亡检测78-80
• 4.4.3.1 MD-4对SNU-387的凋亡影响78-79
• 4.4.3.2 MD-4对MG-63的凋亡影响79-80
• 4.5 小结和讨论80-82
• 第五章 Elisa法检测四种样品中Bax与Bcl-2表达量82-93
• 5.1 实验材料及仪器82-83
• 5.1.1 实验细胞来源82
• 5.1.2 实验仪器及试剂82-83
• 5.2 实验步骤83-84
• 5.3 统计学分析84
• 5.4 实验结果84-92
• 5.4.1 BTW10、BTW11作用对Bcl-2、Bax的影响84-86
• 5.4.2 ZC-17作用2种细胞对Bcl-2、Bax的影响86-89
• 5.4.3 MD-4作用2种细胞对Bcl-2、Bax的影响89-92
• 5.5 小结92-93
• 结论93-94
• 致谢94-95
• 参考文献95-100
• 攻读硕士学位期间发表的论文及科研成果100-101
• 附录101-105

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 刘河;张敏;;自噬在肝癌发生发展中的作用[J];包头医学;2014年04期

2 岳文华;徐坤;冯育林;张天;许琼明;杨世林;刘艳丽;;白头翁皂苷D体外抗肝癌作用及其机制研究[J];中草药;2014年22期

3 陈美娟;赵若琳;张旭;;麦冬皂苷对非小细胞肺癌细胞株NCI-H157细胞周期及PI3K-AKT-mTOR信号通路的影响研究[J];中药药理与临床;2014年05期

4 岳珊珊;苏颖;;麦冬抗肿瘤作用的研究进展[J];海峡药学;2014年01期

5 袁春丽;孙立;袁胜涛;寇俊萍;余伯阳;;麦冬有效成分的药理活性及作用机制研究进展[J];中国新药杂志;2013年21期

6 罗颖颖;陈兰英;崔亚茹;段萌;王木兰;郭建生;;白头翁皂苷抑制人HT29结肠癌细胞增殖及诱导凋亡作用研究[J];中药药理与临床;2013年05期

7 许秋菊;侯莉莉;胡国强;谢松强;;麦冬皂苷B诱导人宫颈癌HeLa细胞自噬的机制[J];药学学报;2013年06期

8 赵彦超;顾耘;;细胞凋亡通路研究进展[J];现代医学;2013年04期

9 马琴国;李天庆;;紫草化学成分及药理作用研究进展[J];甘肃中医学院学报;2013年02期

10 杨峥旭;杨东;舒勇;;骨肉瘤化疗进展[J];广东医学;2013年07期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 李胜;Skp2基因沉默对人肺癌细胞生物学活性的影响及机制研究[D];重庆医科大学;2008年

中国硕士学位论文全文数据库 前3条

1 涂显琴;峨参提取物抗肿瘤活性的初步研究[D];西南交通大学;2012年

2 谢鑫;超声微泡负载自杀基因HSV1-TK联合前药更昔洛韦对前列腺癌细胞抑制效应的研究[D];重庆医科大学;2012年

3 秦立红;灵芝多糖抗肿瘤作用的分子机制研究[D];吉林农业大学;2007年

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本文编号：263012