氯氮平代谢产物分析方法开发及其在大鼠和人肝微粒体中的代谢产物研究

发布时间：2017-03-23 05:18

  本文关键词：氯氮平代谢产物分析方法开发及其在大鼠和人肝微粒体中的代谢产物研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：近年来,药物代谢分析经过快速的发展已经成为药物代谢动力学研究中的一个重要部分,而不断完善的液质联用技术被广泛的应用于药物代谢分析的研究中。相比于传统的液相色谱技术,具有高灵敏度、高通量和高准确性的优点。本论文旨在建立新型灵敏、高通量、高准确性的药物代谢产物分析方法,并用于分析氯氮平在人和大鼠肝微粒体中的代谢产物。同时,对于催化氯氮平产生主要代谢产物的CYP酶进行了更进一步的研究。本论文第一章概述了药物代谢及其分析方法的发展概况,回顾了现有的MRM和MIM的检测方法,随后讨论了MRM和MIM方法在检测药物代谢产物中的应用,以及CYP酶主导氯氮平代谢的研究现状。同时也对本论文的主要研究工作内容做了介绍。本论文第二章使用新建立的分析方法DE-DD(动态排除与数据依赖联用),分析普萘洛尔、维拉帕米及氨氯地平在大鼠肝微粒体中的代谢产物,并与已报道文献比较,检测方法的准确性；使用新方法分析氯氮平在大鼠和人肝微粒中的代谢产物,并推测出可能的代谢途径,分析新发现的代谢产物。所有试验药品在肝微粒中进行孵育,在37℃条件下经水浴振荡,在达到孵育完成时间后使用甲醇终止反应,离心样品取上清液,在氮气下进行样品浓缩,以水-0.1%甲酸为水相,乙腈-0.1%甲酸为有机相,流速为0.6 mL/min, Thermo Hypersil-C 18 (2.1 × 50 mm, 1.9 μm)色谱柱进行梯度洗脱分离。采用Thermo LTQ XL型线性离子阱质谱仪,新型电喷雾电离源(HESI),全扫描监测(Full scan),同时进行二级碎片和三级碎片扫描。考察DE-DD方法的所得结果,并以此结果同相关报道的文献进行比较,确定所得结果的可靠性以及准确性。本方法能够较为全面的发现药物体外模拟代谢实验中所产生的代谢产物,并同时可以获取代谢产物的多级碎片信息,节约样品分析次数；能够在针对未知化合物进行代谢产物分析时快速、准确和高效的获取代谢物质谱碎片信息,为下步的代谢物结构鉴定提供丰富的质谱信息。论文第三章我们使用DE-DD的分析方法分析氯氮平在人和大鼠肝微粒中孵育后的样品,样品孵育的实验操作与普萘洛尔、维拉帕米和氨氯地平的相同。根据DE-DD方法所得的结果,分析氯氮平在人和大鼠肝微粒体中的代谢差异。并由结果推测出可能的代谢途径,比较氯氮平在不同种属间的代谢差异。根据实验分析的结果,发现氯氮平主要的代谢产物在大鼠和人之中是有较大的差异。其中氯氮平在大鼠肝微粒体中的主要代谢产物为去甲基化氯氮平。而氯氮平在人肝微粒体中的主要的代谢产物为氮-氧化氯氮平。同时,葡萄糖醛酸化氯氮平为人肝微粒体中所独有的代谢产物；去甲基氧化氯氮平和开环氧化氯氮平为大鼠肝微粒体中所独有的代谢产物。论文第四章我们选取了人肝微粒体为模型,进行体外模拟代谢实验,旨在发现催化氯氮平在人肝微粒体中主要代谢产物的CYP酶亚型。因此进行关于催化氯氮平代谢的CYP酶筛选实验,选取1A2、2B6、2C8、2C9、2C19、2D6和3A4为代表的CYP酶亚型进行孵育实验,这7种亚型基本占到了CYP450的92%以上,因此可以获得较为可靠的结果。同时分别考虑含有抑制剂和不含有抑制剂的两种情况。经过样品分析后,总结所得实验数据,表明在单种亚型CYP酶的孵育体系中,主导氯氮平在人肝微粒体中代谢的主要酶为1A2。2D6和3A4也参与氯氮平的代谢,但不是催化氯氮平代谢的主要酶。其中1A2主要催化去甲基化氯氮平的产生,2D6参与催化去甲基氯氮平,3A4参与催化氮氧化氯氮平。论文第五章我们对所有的实验结果进行了汇总以及讨论,得出了一下结论。本论所建立的代谢产物分析方法具有灵敏、高效、快速的特点,可用于药物体外代谢产物分析以及代谢物结构判断,为药物开发过程中提供丰富的代谢信息。同时通过对氯氮平在体外代谢产物的分析研究,发现氯氮平在人肝微粒体中主要的代谢途径是去甲基化和N-氧化,其中去甲基代谢为主要途径,通过使用CYP酶的筛选发现去甲基化途径是通过CYP1A2催化进行；CYP3A4和CYP2D6不是催化氯氮平代谢的主要酶,但是CYP3A4参与催化N-氧化代谢,CYP2D6参与催化去甲基代谢。
【关键词】：动态排除与数据依赖 氯氮平 代谢产物鉴定
【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R917
【目录】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 第一章 绪论10-21
• 1. 药物代谢组学10
• 2. 氯氮平研究现在10-13
• 2.1 精神失常和抗精神失常药物的研究10-12
• 2.2 氯氮平(Clozapine,CLZ)12
• 2.3. CYP酶主导氯氮平代谢12-13
• 3. 现有检测方法及存在的问题13-19
• 3.1. LC-MS液质联用分析技术13-15
• 3.2. 现有的测定方法15-18
• 3.3. 关于CYP酶主导氯氮平代谢的研究现状18-19
• 4. 本论的意义19-21
• 第二章 动态排除-数据依赖扫描法分析普萘洛尔、维拉帕米和氨氯地平在人肝微粒体中的代谢物21-40
• 1. 引言21-22
• 2. 实验部分22-31
• 2.1 仪器、试剂、溶液配置及样品制备22-24
• 2.2 动态排除-数据依赖扫描法分析普萘洛尔、维拉帕米及氨氯地平的分析方法建立和条件优化24-31
• 3. 结果与讨论31-40
• 第三章 使用DE-DD方法研究氯氮平在大鼠和人肝微粒体中的代谢差异40-56
• 1. 引言40
• 2. 实验部分40-43
• 2.1 仪器、试剂、溶液配置及样品制备40-42
• 2.2. LC-MS法研究氯氮平在大鼠和人肝微粒体中的代谢差异42-43
• 3. 实验结果43-46
• 4. 氯氮平及其代谢物结构解析46-55
• 4.1 氯氮平的质谱结构解析46-47
• 4.2 M1和M2(氧化氯氮平)47-49
• 4.3 M3(葡萄糖醛酸化氯氮平)49-50
• 4.4 M4(去甲基氧化氯氮平)50-51
• 4.5 M5(去甲基化氯氮平)51-52
• 4.6 M6(开环氧化氯氮平)52-53
• 4.7 M7(开环氧化氯氮平)53-54
• 4.8 M8(氮氧化氯氮平)54-55
• 5. 实验结果与讨论55-56
• 第四章 对催化氯氮平主要代谢产物生产的酶系的深入研究56-70
• 1. 引言56
• 2. 实验部分56-61
• 2.1 仪器、试剂、溶液配置及样品制备56-59
• 2.2 色谱条件59-61
• 3. 数据处理61-62
• 3.1 数据处理计算公式61
• 3.2 实验结果61-62
• 4. 原始数据62-69
• 5. 结果与讨论69-70
• 第五章 实验结果汇总及结论70-73
• 1. 实验结果汇总70-71
• 1.1 DE-DD方法实验结果汇总70
• 1.2. 氯氮平在不同种属中的代谢差异70-71
• 1.3 主导氯氮平代谢的CYP酶筛选71
• 2. 结论71-73
• 致谢73-74
• 参考文献74-76

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 张信中;李迎;;液相色谱质谱联用检测药物反应性代谢物的研究进展[J];国际药学研究杂志;2009年05期

2 赵爱玲,赵靖平;与氯氮平代谢有关的P450酶及其遗传多态性[J];四川精神卫生;2002年01期

中国重要会议论文全文数据库 前1条

1 刘兆颖;戴梦红;陶燕飞;袁宗辉;;肝微粒体孵育法在药物代谢中的应用[A];第八次全国药物与化学异物代谢学术会议论文摘要[C];2006年

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本文编号：263020