中枢神经系统药物的QuEChERS-液质联用系统分析

发布时间：2017-04-15 22:19

  本文关键词：中枢神经系统药物的QuEChERS-液质联用系统分析，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：中枢神经系统药物由于所用人群特殊,个体差异大,治疗指数低,长期应用易产生依赖性,出现中毒事件频率较高。因此,临床毒物分析对人体内的毒物进行定性和定量分析,对于急性中毒病人的诊治和预防控制具有重要意义。本课题以成瘾性镇痛药、麻醉药、抗精神病药、苯二氮卓类等60种主要作用于中枢神经系统药物作为研究对象,研究Qu ECh ERS(Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged、Safe)技术应用于中毒患者血浆样品前处理方法,并采用超高效液相色谱-光电二极管阵列(UPLC-PDA)及超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-MS)进行筛查,从而实现对未知药物的快速定性、定量检测。1.建立中毒分析的血浆样品预处理Qu ECh ERS方法取1ml血浆,加入2ml含1%乙酸的乙腈;加入无水硫酸镁约250mg,旋涡混匀60s,以7000r/min速度离心5min;取上清液加入到Qu ECh ERS净化管(含有50 mg C18吸附剂,250 mg无水硫酸镁),旋涡混匀混合1 min,10000r/min离心5 min。上清液供超高效液相色谱及液质联用进行检测。2.建立基于Qu ECh ERS技术的同时检测血浆中60种中枢神经系统药物UPLC-PDA方法样品处理液采用Agilent ZORBAS Eclipse plus色谱柱(1.8μm,2.1mm×100mm)分离,流动相:A:0.1%甲酸;B:0.1%甲酸+甲醇。梯度洗脱程序:0.5-11.5min B从8%上升至74%;11.5-12.5min B从74%上升至98%;12.5-17.5min B从98%降至8%;17.5-18min恢复初始条件8%B;18-24min平衡6 min。流速:0.4ml/min,温度为35°C;进样体积为5μL;扫描波长为200-360nm;检测波长为210nm。采集60种中枢神经系统药物的紫外光谱图,扫描波长为200-360nm;联合紫外光谱库与保留时间对待分析物进行定性。60种中枢神经系统药物在低、中、高三种浓度的平均回收率均超过50%,其中浓度为10μg/m L的药物中,有56种的平均回收率超过80%;浓度为5μg/m L的药物中,有51种的平均回收率超过80%;浓度为1ug/m L的药物中,有39种药物的平均回收率超过80%。6次测定的RSD(Relative standard deviation)4在0.2%-12.9%之间,方法的LOD(Limits of Detection)为0.05-0.83μg/m L。3.建立基于Qu ECh ERS技术的同时检测血浆中60种中枢神经系统药物UPLC-MS-MS方法采用UPLC-MS-MS,通过优化60种药物的质谱条件及参数,确定了各药物的特征筛查离子,建立临床常见中毒药物的二级质谱库。样品处理液采用Agilent ZORBAS Eclipse plus色谱柱(1.8μm,2.1mm×100mm)分离,以0.1%甲酸+甲醇作为流动相,梯度洗脱,多重反应监测,52种药物采用正离子检测,8种药物采用负离子检测。60种药物的平均回收率在50.10%-132.40%之间。其中浓度为500μg/L的药物中,有39种药物的平均回收率超过80%;浓度为100μg/L的药物中,有38种药物的平均回收率超过80%;浓度为25μg/L的药物中,有34种药物的平均回收率超过80%。6次测定的RSD在1.1%-19.1%之间,LOD为0.02-5.00μg/L。对UPLC-MS-MS方法的基质效应进行评估,血样经Qu ECh ERS方法处理后,60种药物绝对基质效应不明显,基质效应因子在80.6%-118.2%之间。结果表明UPLC-MS-MS多反应监测技术筛选分析方法兼具有选择离子扫描的高灵敏度和二级质谱结构特征的高选择性,可用于系统毒物筛选、确证和定量分析。4.病例分析应用建立的方法对临床药物中毒的样品进行分析,共收集病例50例。血浆样品通过Qu ECh ERS样品前处理后,采用UPLC-PDA以及UPLC-MS-MS方法分析,成功检出卡马西平、苯妥英、苯巴比妥、奋乃静等多种药物。UPLC-PDA方法检出率为84%;UPLC-MS-MS方法检出率为98%。结论1.Qu ECh ERS方法可作为中枢神经系统药物系统毒物分析通用的样品前处理方法。2.UPLC-PDA扫描方法,方法简单,快速,适用于大多数基层实验室的常规应用。UPLC-MS-MS方法兼具有高灵敏度和高选择性,可用于中枢神经系统药物中毒的筛查、确证和定量。3.UPLC-PDA方法与UPLC-MS-MS方法均可应用于临床药物中毒的鉴定,UPLC-MS-MS较UPLC-PDA,检出率高,对于中毒浓度低的药物更具有优势。可以预见,质谱在中毒药物的筛查分析的应用将更为广泛并成为常规监测手段。
【关键词】：Qu ECh ERS UPLC-PDA UPLC-MS-MS 系统毒物分析 中枢神经系统药物 多反应监测
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R96;O657.63
【目录】：

• 附录5-7
• 中文摘要7-10
• ABSTRACT10-13
• 1 前言13-18
• 1.1 研究背景13-14
• 1.2 系统毒物分析中常用的样品前处理技术14-15
• 1.3 Qu ECh ERS方法15-16
• 1.3.1 简介15
• 1.3.2 原理15
• 1.3.3 特点和优势15-16
• 1.3.4 在本文的应用16
• 1.4 系统毒物分析的常见检测方法16-17
• 1.5 研究内容17-18
• 2 基于Qu ECh ERS技术的UPLC-PDA同时测定血浆中60种中枢神经系统药物18-46
• 2.1 实验部分18-27
• 2.1.1 实验材料18
• 2.1.2 实验仪器18
• 2.1.3 样品处理18-19
• 2.1.4 标准系列19-26
• 2.1.5 回收率与精密度测定26
• 2.1.6 UPLC-DAD色谱条件26-27
• 2.1.7 紫外光谱库和保留时间库的建立27
• 2.2 结果与讨论27-44
• 2.2.1 Qu ECh ERS血浆样品预处理方法结果27-31
• 2.2.2 UPLC-PDA检测系统31-39
• 2.2.3 标准曲线、线性范围39-41
• 2.2.4 方法的回收率、精密度与检测限41-44
• 2.3 小结44-46
• 3 基于Qu ECh ERS技术的UPLC-MS-MS同时检测血浆中60种中枢神经系统药物46-67
• 3.1 实验部分46-51
• 3.1.1 实验材料46
• 3.1.2 实验仪器46-47
• 3.1.3 样品处理47
• 3.1.4 标准系列及样品测定47
• 3.1.5 回收率与精密度测定47
• 3.1.6 基质效应测定47
• 3.1.7 色谱质谱条件47-51
• 3.2 结果与讨论51-66
• 3.2.1 色谱质谱条件的选择和优化51-57
• 3.2.2 色谱条件的选择和优化57-60
• 3.2.3 样品提取与净化60
• 3.2.4 标准曲线与检测限60-62
• 3.2.5 方法的回收率与精密度62-66
• 3.2.6 基质效应评价66
• 3.3 小结66-67
• 4 病例分析67-77
• 5 结论77-78
• 参考文献78-81
• 文献综述81-90
• 参考文献87-90
• 致谢90

【共引文献】

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本文编号：309380