单宁酸对血小板生成的影响及抗辐射作用研究

发布时间：2017-04-18 21:09

  本文关键词：单宁酸对血小板生成的影响及抗辐射作用研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：临床上原发性或继发性血小板减少症以及由电离辐射引起的骨髓造血功能损伤均可导致血小板水平严重低下。血小板在人体生理和病理过程中发挥着止血、伤口愈合、修复血管、血栓形成、炎症反应等重要作用。血小板严重减少可导致机体出血、感染、疾病预后差,甚至死亡[1]。目前临床上治疗血小板减少症的药物种类较少,并且它们大多还存在着起效慢、副作用大及价格昂贵等缺点。此外,现有升血小板药物基本上都是注射给药,而相对于注射给药,口服给药更为安全,尤其是类似食疗方式更能为病人所接受。因此,通过寻找并开发食物中具有促进血小板生成和抗辐射作用的特殊成分,或许能为有效防治电离辐射所致血小板减少提供新思路。骨髓中的巨核细胞来源于造血干细胞,并通过增殖、分化、多倍体形成等过程产生血小板[2]。因此,促进巨核细胞增殖、分化和成熟,减轻并保护各种原因所致的巨核细胞损伤,可直接影响血小板的生成数量和体内血小板水平。血小板生成素(TPO)是血小板生成最重要的调控因子,其主要通过激活相关信号通路而促进巨核细胞的增殖、分化和成熟[3]。食物中的某些成分可能具有类似于TPO或者其它细胞因子的功能,对巨核细胞和血小板生成起到一定的调控作用。单宁酸(Tannic acid,TA)是广泛存在于石榴、核桃、葡萄籽、花生、余甘子等果实成分中的一种多酚化合物[4]。在民间一直都有花生红衣、石榴等能够补血和升血小板的说法,但具体TA是否可以直接促进血小板生成及其可能机制尚不清楚。不过有研究表明,TA能够通过激活ERK和p38激酶通路而影响某些细胞的分化和成熟[5],至于其是否也会对巨核细胞的分化和成熟发挥调控作用?值得深入探讨。此外,根据化学结构特点,TA又具有明显的抗氧化应激活性[6],在化学物质诱导器官、组织损伤以及动物衰老的情况下给予TA可发挥一定的保护作用,并且TA能够通过抑制氧化应激而减轻化学毒物和辐射诱导的DNA损伤[7]。所以,我们推测TA可能也会对辐射诱导的骨髓巨核细胞损伤起到一定的防护作用。为此,本文重点探讨了TA对正常及放射损伤情况下血小板生成的影响作用,并对其相关机制进行了深入分析。实验分为两部分,第一部分主要研究TA对巨核细胞增殖、分化、成熟和产生血小板的影响:选择具有增殖能力的人M07e细胞株为早期巨核祖细胞代表,观察ta是否具有促进巨核细胞增殖的作用;选择成熟且具有分化能力的hel、meg-01细胞株和人原代巨核细胞,观察ta促巨核细胞分化及多倍体形成能力,并探索相关机制;最后,小鼠体内应用ta,观察外周血小板水平变化,明确ta在体内是否具有促血小板生成作用。第二部分主要研究ta对电离辐射诱导巨核细胞损伤的防治作用及相关机制:首先在体外观察给予不同浓度ta预处理对电离辐射(10.0gy60coγ射线照射)诱导m07e细胞损伤的保护作用,分析活性氧(ros)水平、线粒体膜电位(mmp)和凋亡率变化,明确ta减轻或阻抗电离辐射诱导巨核细胞损伤的可能机制;进而,复制急性放射损伤小鼠实验动物模型,分别于照前、照后及照前+照后给予ta处理,观察照后21天内小鼠存活率,并分析外周血小板水平、骨髓巨核细胞数目和集落数量变化,以验证体内应用ta是否能够有效防治电离辐射诱导的骨髓巨核细胞损伤和血小板减少。主要结果与结论:1、cck-8法检测发现,不同浓度ta处理均不能促进巨核细胞株m07e的增殖,提示ta对早期巨核祖细胞的增殖无显著影响。2、流式细胞分析发现,巨核细胞株hel、meg-01及原代培养巨核细胞受到ta处理后,成熟巨核细胞的分化标记分子cd42b表达水平显著升高,四倍体细胞的比例也显著增多,说明ta具有促进巨核细胞分化、成熟的作用。3、westernblot结果表明,ta能够显著激活erk1/2信号通路,而给予erk1/2信号通路阻断剂u0126则能抑制ta的促巨核细胞分化作用,提示ta可能通过激活erk1/2信号通路而促进巨核细胞的分化与成熟。4、balb/c小鼠给予300mg/kg/d的ta溶液灌胃处理,外周血小板水平显著升高,进一步证实ta应用后能够促进体内血小板的生成。5、mtt法检测发现ta能够剂量依赖性地提高受照(10.0gyco60γ射线照射)m07e细胞的存活率;流式细胞分析结果显示,一定浓度的ta能够显著抑制电离辐射诱导的m07e细胞凋亡,表明ta对巨核细胞具有辐射防护作用。6、dcfh-da荧光分析结果显示,ta能够显著降低放射损伤巨核细胞内的总活性氧ros水平,提示ta对巨核细胞的辐射防护作用可能与其拥有的显著抗氧化应激能力有关。7、流式细胞术检测罗丹明123标记的巨核细胞荧光强度变化结果显示,单纯辐照组细胞的荧光强度低于正常对照组,ta处理组细胞的荧光强度则显著高于单纯照射组,提示ta可能通过稳定线粒体膜电位而发挥抑制辐射诱导巨核细胞凋亡的作用。8、采用重度放射损伤(5.0gyco60γ射线照射)小鼠观察ta处理对血小板水平恢复的影响,结果发现照后第9-21天,ta处理组小鼠的外周血小板水平显著高于单纯照射组,在第18天时TA处理组小鼠的血小板计数基本恢复到正常水平,而单纯照射组还处在缓慢恢复期;骨髓切片HE染色结果显示,TA处理组小鼠骨髓组织中包括巨核细胞在内的有核细胞数目显著增多;体外集落形成实验发现,TA照前给药组多系集落形成数量显著高于单纯照射组,说明TA能够有效防护电离辐射引起的巨核细胞损伤,并能促进血小板水平的快速恢复。9、照前及照前+照后灌胃方式给予小鼠TA处理,可以显著提高极重度放射损伤(7.0Gy Co60γ射线全身一次性照射)小鼠的21天存活率,进一步证实TA具有明显的辐射防护作用。总之,通过本实验我们首次发现TA具有促进巨核细胞分化、成熟和血小板生成的作用,并初步阐明了其作用机理;同时,发现TA还能通过抗氧化应激途径减轻电离辐射对骨髓巨核细胞的损伤作用,提示TA在防治电离辐射引起的血小板减少方面具有突出疗效,值得进一步研究。
【关键词】：单宁酸、辐照损伤 巨核细胞 血小板 分化 凋亡
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R965
【目录】：

• 英文缩写一览表4-6
• 英文摘要6-10
• 中文摘要10-13
• 第一章 前言13-16
• 1.1 选题缘由13
• 1.2 研究背景13-14
• 1.3 研究意义14
• 1.4 研究内容14-15
• 1.5 研究方法15-16
• 第二章 单宁酸对血小板生成的影响及调控机制研究16-32
• 2.1 引言16
• 2.2 材料与方法16-23
• 2.3 结果23-29
• 2.4 讨论29-31
• 2.5 小结31-32
• 第三章 单宁酸对电离辐射诱导巨核细胞损伤的防护作用及相关机制研究32-50
• 3.1 引言32
• 3.2 材料与方法32-39
• 3.3 结果39-46
• 3.4 讨论46-48
• 3.5 小结48-50
• 全文总结50-52
• 参考文献52-56
• 文献综述 天然活性成分调节巨核细胞-血小板研究进展56-66
• 参考文献62-66
• 攻读学位期间的研究成果66-67
• 致谢67

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 陈石磊;陈芳;许杨;王崧;王艾平;粟永萍;王军平;;重组胰岛素样生长因子-Ⅰ促进辐射损伤小鼠血小板水平的恢复[J];第三军医大学学报;2011年22期

2 吴苏南;许杨;陈石磊;申明强;陈芳;陈默;张舟;王崧;粟永萍;程天民;王军平;;单宁酸对电离辐射所致巨核细胞损伤的保护作用[J];第三军医大学学报;2015年07期

3 刘屏;穆丽华;韩亚亮;王东晓;马亮;马晓菲;王波;;鸡血藤活性化合物儿茶素结构修饰及抗辐射作用研究[J];解放军药学学报;2007年05期

4 贾海泉;金宏;李培兵;吴健全;南文考;王永辉;邓炳楠;高兰兴;;大豆异黄酮对辐射小鼠骨髓细胞的防护作用[J];解放军预防医学杂志;2010年01期

5 何科;;三七的药理作用研究进展[J];中国民族民间医药;2011年06期

6 陈国仙;花生衣和三七加味治疗血小板减少性紫癜38例疗效观察[J];云南中医中药杂志;2002年05期

  本文关键词：单宁酸对血小板生成的影响及抗辐射作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：315744