基于Tyr侧链连接的固相肽合成方法探讨与紫杉醇-多肽偶合物的合成

发布时间：2017-04-19 17:08

  本文关键词：基于Tyr侧链连接的固相肽合成方法探讨与紫杉醇-多肽偶合物的合成，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：多肽类药物具有药效高、生物利用度好、副作用小且不易蓄积等优点。固相多肽合成是多肽重要的获得途径之一,但传统的固相合成法在修饰肽链C端时,存在某些不足,不能方便地在肽链N端、C端分别进行衍生化或同时进行衍生化。基于侧链连接的固相多肽合成法为解决这一问题提供了一种选择。本文设计了一种基于Tyr侧链连接的固相多肽合成方法,将酪氨酸的侧链酚羟基与Wang树脂的活性羟基通过Mitsunobu反应实现连接,使氨基酸的N端和C端同时裸露；肽链N端采用Fmoc基团保护,用20%哌啶/DMF脱保护；肽链C端采用甲酯保护,用0.1 M LiOH四氢呋喃/水溶液脱保护；肽链N端与C端的酰胺缩合统一采用PyBOP/DIEA作为缩合试剂。我们采用上述固相合成方法,成功合成了八个三肽和一个五肽衍生物；通过高效液相和质谱,对合成过程中的重要中间体和终产物进行了分析,验证了该方法的可行性。紫杉醇是靶向肿瘤微管的抗癌药物,在临床上广泛用于肺癌、胃癌等多种癌症的治疗。奥曲肽、Tyr3-奥曲肽、伐普肽是人工合成的生长抑素衍生物。由于生长抑素受体(SSTR)亚型Ⅱ(SSTR 2)在肿瘤中广泛分布,而且SSTR 2亚型对奥曲肽等生长抑素衍生物有选择性。因此,我们以三种生长抑素类似物奥曲肽、Tyr3-奥曲肽、伐普肽作为载体,设计了紫杉醇一多肽偶合物,旨在进一步提高紫杉醇的肿瘤选择性,改善生物利用度,降低不良反应。我们在紫杉醇分子中选择性地引入丁二酸单元,通过酰胺键与奥曲肽、Tyr3-奥曲肽、伐普肽偶联,合成了(PTX)2-octreotie、(PTX)2-Tyr3-octreotide、(PTX)2-vapreotide偶合物。通过MTT法,评价了这些紫杉醇一多肽偶合物对HeLa细胞、A549细胞、MCF-7细胞、K562细胞的生长抑制作用。其中,化合物(PTX)2-octreotide和(PTX)2-Tyr3-octreotide对肿瘤细胞具有良好的抑制活性,对HeLa细胞的ICs0值分别为4.23 nM和4.17 nM,对A549细胞的IC50值分别为30.11 nM和26.79 nM,对K562细胞的IC50值分别为3.06 nM和6.32 nM。药代动力学研究表明,(PTX)2-Tyr3-octreotide可以改善紫杉醇的药代动力学指标。
【关键词】：多肽 固相多肽合成 紫杉醇 生长抑素类似物 肿瘤靶向性 药代动力学
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R914
【目录】：

• 中文摘要8-10
• ABSTRACT10-12
• 符号说明12-13
• 第一部分 基于Tyr侧链连接的固相肽合成方法探讨13-46
• 第一章 多肽与多肽化学合成13-20
• 1.1 多肽13-14
• 1.2 多肽的化学合成14-15
• 1.3 固相多肽合成法15-20
• 第二章 基于Tyr侧链连接的固相肽合成方法的设计20-27
• 2.1 保护基的选择与脱保护22-24
• 2.2 酪氨酸与树脂的连接24-25
• 2.3 树脂剩余活性基团的封闭25
• 2.4 树脂连接效率的检测25-26
• 2.5 碳链的延长26-27
• 2.6 产物的切割27
• 第三章 实验27-44
• 3.1 实验试剂与仪器27
• 3.2 产物的检测27-28
• 3.3 氨基酸中间体的合成28-30
• 3.4 Fmoc-Tyr-OMe与Wang树脂连接30-31
• 3.5 Boc-Leu-Tyr(Wang resin)-OH的合成31-33
• 3.6 H-Leu-Tyr-Leu-X的合成33-36
• 3.7 Ac-Leu-Tyr(Wang resin)-OH的合成36-37
• 3.8 Ac-Leu-Tyr-Leu-X的合成37-40
• 3.9 H-Leu-Leu-Tyr-Leu-Leu-NHNHFmoc的合成40-44
• 第四章 总结与展望44-46
• 第二部分 紫杉醇-多肽偶合物的合成46-69
• 第一章 简介46-50
• 1.1 紫杉醇简介46
• 1.2 紫杉醇的结构修饰46-50
• 第二章 紫杉醇-多肽偶合物的设计50-53
• 第三章 实验53-57
• 3.1 实验试剂与仪器53-54
• 3.2 2'-O-丁二酰紫杉醇的合成54
• 3.3 紫杉醇-多肽偶合物的合成54-57
• 第四章 紫杉醇-多肽偶合物抗肿瘤活性研究57-58
• 4.1 肿瘤细胞生长抑制实验57
• 4.2 肿瘤细胞生长抑制实验结果及讨论57-58
• 第五章 (PTX)_2-Tyr~3-octreotide大鼠体内药代动力学研究58-68
• 5.1 材料与仪器58-59
• 5.2 大鼠血浆中紫杉醇含量测定方法的建立59-61
• 5.3 大鼠血浆中(PTX)_2-Tyr~3-octreotide含量测定方法的建立61-64
• 5.4 动物实验64-67
• 5.5 讨论67-68
• 第六章 总结与展望68-69
• 参考文献69-77
• 致谢77-78
• 附录：化合物的HPLC与MS图谱78-99
• 攻读硕士学位期间所发表论文99-100
• 学位论文评阅及答辩情况表100

【参考文献】

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1 孙勇,王建安,何红,郭航远,蒋晨阳,周斌全;GPIIb/IIIa拮抗剂integrilin在经皮冠状动脉支架成形术围术期的运用[J];中国现代应用药学;2000年05期

2 王德心;韩香;龚喜;冯鹤鹤;;环肽的合成研究进展[J];有机化学;2008年04期

3 孙永强;钱明霞;严益民;冯晓晖;蒋伟;;曲普瑞林的液相合成[J];中国医药工业杂志;2012年07期

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本文编号：316725