RIN1与脊髓背角Spinophilin之间的相互作用及其调控机制

发布时间：2017-05-01 22:16

  本文关键词：RIN1与脊髓背角Spinophilin之间的相互作用及其调控机制，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:Spinophilin能够与细胞外信号调节激酶(ERK1/2)、蛋白磷酸酶-1(PP1)、突触后致密质-95(PSD-95)等多种信号分子、骨架蛋白相互作用。作为一种锚定蛋白,Spinophilin能将其结合的蛋白(binding partners)定位在特定的亚细胞区域,决定着这些结合蛋白的作用特异性。前期资料显示:Spinophilin表达于脊髓背角,能够抑制兴奋性谷氨酸受体介导的痛觉突触传递,有效缓解外周组织损伤诱发的痛觉超敏。RIN1(Ras and Rab Interacting protein-1)是一种多功能的胞内信号蛋白,对调节ERK1/2、小GTP酶Rab5、酪氨酸激酶c-ABL等信号分子的活性至关重要,但RIN1的脊髓功能尚远不清楚。本文探讨了Spinophilin与RIN1之间的相互作用及其调控特征。方法:本研究用免疫共沉淀法,探讨了Spinophilin和RIN1在脊髓背角中的相互作用;通过大鼠鞘内注射N-甲基-D-天门冬氨酸(N-methyl-D-aspartate;NMDA)、代谢型谷氨酸受体1/5(metabotropic glutamate receptors 1/5;m Glu R1/5)激动剂DHPG、以及后足底皮下注射完全佛氏佐剂(Complete Freund’s Adjuvant;CFA),探讨了NMDA受体、m Glu R1/5受体以及外周炎性损伤对脊髓背角Spinophilin和RIN1之间的相互作用的影响。结果:(1)免疫印迹实验显示:RIN1表达于大鼠脊髓背角;(2)免疫共沉淀实验显示:抗Spinophilin的特异性抗体,能够从大鼠脊髓背角中共沉淀出RIN1;抗RIN1的特异性抗体,也能够共沉淀出Spinophilin,提示:RIN1和Spinophilin之间存在着分子间的、直接或间接的相互作用;(3)正常成年大鼠后足底皮下注射CFA(20μl),能够明显降低Von Frey纤维诱发的缩足阈值,诱发痛觉超敏;同时,抗Spinophilin的特异性抗体从脊髓背角中沉淀出的RIN1含量明显减少,提示:外周组织损伤会打断RIN1和Spinophilin之间的相互作用;(4)给正常成年大鼠鞘内注射NMDA受体激动剂NMDA(1μg)或m Glu R1/5受体激动剂DHPG(20μg),在降低缩足阈值的同时,也会减弱RIN1和Spinophilin的相互作用,提示:RIN1/Spinophilin的结合受到NMDA受体和m Glu R1/5受体的调控;(5)此外,改变蛋白磷酸酶的活性,也会影响RIN1和Spinophilin的结合,因为给正常成年大鼠鞘内注射钙调磷酸酶(Calcineurin)抑制剂Cyclosporine A(50μg)后,抗RIN1的特异性抗体从脊髓背角中沉淀出的Spinophilin含量会明显减少;(6)NMDA受体的NR2A亚基可能也通过Spinophilin与RIN1相互作用。结论:Spinophilin与RIN1具有密切的相互作用,两者的相互作用受到NMDA受体、m Glu R1/5受体以及蛋白磷酸酶的调节。
【关键词】：N-甲基-D-天门冬氨酸型谷氨酸受体 代谢型谷氨酸受体 脊髓背角 完全弗氏佐剂 Ras and Rab Interacting protein-1 Spinophilin
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R96
【目录】：

• 中文摘要3-5
• 英文摘要5-9
• 第一章 前言9-14
• 1.1 N-甲基D-天门冬氨酸（N-methyl-D-aspartate; NMDA）受体和疼痛的关系9
• 1.2 mGlu R1/5 受体与疼痛的关系9-10
• 1.3 Spinophilin的分子结构10
• 1.4 Spinophilin的生物学功能10-11
• 1.5 RIN1的分子结构和生物学活性11-14
• 第二章 实验材料和方法14-25
• 2.1 实验材料14-20
• 2.1.1 实验动物14
• 2.1.2 实验仪器与耗材14-15
• 2.1.3 实验试剂15-16
• 2.1.4 实验溶液16-20
• 2.2 实验方法20-25
• 2.2.1 行为学测定20-21
• 2.2.2 药物鞘内注射21
• 2.2.3 药物皮下注射21
• 2.2.4 全细胞组织匀浆样品的制备21-22
• 2.2.5 免疫共沉淀样品的制备22-23
• 2.2.6 免疫印迹法23-24
• 2.2.7 数据处理24-25
• 第三章 实验结果25-37
• 3.1 RIN1在大鼠脊髓背角中的表达25
• 3.2 Spinophilin能够从大鼠脊髓背角免疫共沉淀RIN125-26
• 3.3 RIN1能够从大鼠脊髓背角免疫共沉淀Spinophilin26-27
• 3.4 大鼠后足底皮下注射CFA对Spinophilin和RIN1相互作用的影响27-29
• 3.5 鞘内注射NMDA对Spinophilin和RIN1相互作用的影响29-31
• 3.6 鞘内注射DHPG对Spinophilin和RIN1相互作用的影响31-34
• 3.7 鞘内注射CyclosporineA对Spinophilin和RIN1相互作用的影响34-35
• 3.8 NMDA受体NR2A亚基能够从大鼠脊髓背角免疫共沉淀RIN135-37
• 第四章 讨论37-40
• 4.1 RIN1表达于脊髓背角37
• 4.2 外周组织损伤打断Spinophilin和RIN1在脊髓背角的相互作用37-38
• 4.3 NMDA受体和mGlu R1/5 受体对脊髓背角Spinophilin和RIN1的调控作用38-39
• 4.4 Cyclosporine A打断Spinophilin和RIN1在脊髓背角的相互作用39-40
• 第五章 结论与研究展望40-41
• 5.1 结论40
• 5.2 研究展望40-41
• 缩略词41-44
• 在学期间的研究成果44-45
• 致谢45-46
• 参考文献46-53

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2 魏祥品;慢性脊髓刺激治疗疼痛[J];立体定向和功能性神经外科杂志;2002年03期

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本文编号：339761