辛二酰苯胺异羟肟酸脂质体对人卵巢癌细胞的抑制作用及其机制研究

发布时间：2017-05-04 16:12

  本文关键词：辛二酰苯胺异羟肟酸脂质体对人卵巢癌细胞的抑制作用及其机制研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的辛二酰苯胺异羟肟酸(Suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA),作为组蛋白去乙酰化酶抑制剂中的一员,抗肿瘤活性优良,可抑制肝癌、肺癌、胃癌等多种肿瘤活性。本课题采用脂质体制剂技术制备SAHA脂质体制剂,进行工艺处方优化及质量考察后,研究SAHA脂质体对人卵巢癌细胞作用效果及分子机制,探究新的治疗方法,为进一步的临床应用奠定数据基础。方法采用高效液相色谱分析技术,建立SAHA含量测定方法;根据药物性质,筛选制备方法,以薄膜超声法制备SAHA脂质体,依据单因素考察及正交设计实验筛选SAHA脂质体最佳制备工艺,电镜下观察制剂形态并评价其粒径分布,包封率、释放度和稳定性情况。选取两种卵巢癌细胞SKOV3和HO8910为研究对象,设置空白脂质体对照组和终浓度为1、3、6及10μM SAHA组(SAHA 1~4组),采用CKK-8法分别检测SAHA脂质体对细胞增殖的影响;设置空白脂质体对照组和终浓度为3、6μM SAHA 1、2组,Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测SAHA脂质体对卵巢癌细胞凋亡及周期的影响;利用实时RT-PCR和Western blot技术检测表型相关蛋白的表达水平;建立人卵巢癌细胞SKOV3和HO8910的裸鼠异体移植瘤模型,设置空白脂质体对照组和SAHA脂质体给药组,通过比较荷瘤裸鼠抑瘤率,评价SAHA脂质体体内抗肿瘤作用。结果用高效液相色谱法测量SAHA含量,回归方程为A=1.6865×104C-2321.2,(r2=0.999 8),SAHA在5~160μg·m L-1浓度范围内呈现良好的线性关系,专属性适用、精密度高和回收率均符合实验要求。正交设计实验最佳处方为:药脂比1:5,磷脂和胆固醇质量比5:1,水合介质的体积为10 ml。结果表明采用薄膜超声法制备的SAHA脂质体,成功制备了形态均匀似圆球形,平均粒径160.8±7.5 nm,Zeta电位为33.7±2.5 m V,包封率良好,且质量稳定的SAHA脂质体。SAHA脂质体处理人卵巢癌细胞SKOV3、HO8910后随着SAHA脂质体浓度的增加,卵巢癌细胞SKOV3、HO8910在24、48 h OD值均明显下降(均P0.05);给予SAHA脂质体处理48 h后卵巢癌细胞给药组凋亡率高于对照组(均P0.05);SKOV3和HO8910细胞发生周期阻滞,与对照组比较,给药组SKOV3细胞处于S期和G2/M期比例增高(P0.05),HO8910细胞处于G0/G1期比例增高(P0.05);SAHA脂质体处理卵巢癌细胞48 h后,Cyclin B1和Cdc2(p34)的mRNA表达水平均低于对照组,Caspase-3、p21和p53的mRNA表达水平明显高于对照组(P0.05);Caspase-3、p21和p53蛋白的表达较对照组明显增强,Cyclin B1、Cdc2(p34)蛋白的表达减弱;与对照组比较,SAHA脂质体作用于荷瘤小鼠后,成瘤瘤体明显缩小,抑瘤率效果好。结论SAHA脂质体可显著抑制卵巢癌细胞SKOV3和HO8910增殖,并引起细胞周期阻滞并凋亡水平升高,其作用机制可能通过调节恶性表型相关蛋Caspase3、p53、Cyclin B1和Cdc2(p34)等的表达水平,导致细胞组蛋白乙酰化水平升高,进而发挥体内体外抗肿瘤作用。因此,脂质体制剂作为辛二酰苯胺异羟肟酸一种新的载药系统,具有良好的应用前景。
【关键词】：辛二酰苯胺异羟肟酸 脂质体 卵巢癌
【学位授予单位】：锦州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R96
【目录】：

• 中文论著摘要5-8
• 英文论著摘要8-11
• 英文缩略语11-12
• 前言12-14
• 第一章 SAHA脂质体分析方法的建立14-23
• 实验材料与方法14-17
• 实验结果17-22
• 讨论22-23
• 第二章 SAHA脂质体处方和制备工艺研究23-30
• 实验材料与方法23-25
• 实验结果25-29
• 讨论29-30
• 第三章 SAHA脂质体质量评价及抗肿瘤作用研究30-44
• 实验材料与方法30-34
• 实验结果34-41
• 讨论41-44
• 本研究创新性的自我评价44-45
• 参考文献45-47
• 附录47-58
• 一、文献综述 辛二酰苯胺异羟肟酸药理作用研究进展47-55
• 参考文献53-55
• 二、在学期间科研成绩55-56
• 三、致谢56-57
• 四、个人简介57-58

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本文编号：345395