Wnt5a信号通路介导核苷类逆转录酶抑制剂引起的神经炎症研究

发布时间：2017-05-05 11:10

  本文关键词：Wnt5a信号通路介导核苷类逆转录酶抑制剂引起的神经炎症研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：核苷类逆转录酶抑制剂(NRTI)作为高效抗逆转录病毒治疗(HAART)的一个核心组成部分,被广泛用于抑制人类免疫缺陷病毒(HIV)的复制和增殖。然而,长期服用NRTI类药物可引发神经毒性,主要表现为神经炎症和多种神经认知障碍,如阿耳茨海默氏病、帕金森氏病和慢性疼痛等。尽管NRTI用于治疗艾滋病已有数十年,但目前对于NRTI引发神经炎症的具体机制还是不甚明了。Wnt5a是非经典Wnt信号的主要配体之一,在组织发育和信号转导过程中发挥重要作用。最近的研究发现,Wnt5a参与和调控多种神经炎症反应。所以我们推测Wnt5a在NRTI导致的神经炎症中可能起到关键性作用。本研究不仅有助于理解NRTI在中枢神经系统中对神经炎症发生的影响,而且将为治疗HIV-1相关的神经炎症提供潜在的药物靶点。为了探究NRTI的治疗对中枢神经系统不同组织中炎症因子表达情况的影响,我们分别用NRTI类药物AZT(100 mg/kg;sc./days)、3TC(50 mg/kg;sc./days)和D4T(10 mg/kg;sc./days)对C57Bl/6小鼠进行2、5、10和14天的处理,并于NRTI类药物给药结束时收集中枢神经系统的组织。通过Western blotting分析NRTI处理不同时间后小鼠大脑皮层、海马和脊髓组织中炎症因子IL-1β,TNF-α和IL-6的表达水平。Western blotting结果表明NRTI处理后,炎症因子在三种神经组织中都显著性增加。我们分别使用GFAP和CD11b标记星形胶质细胞和小胶质细胞,进一步研究NRTI通过激活哪一类神经细胞来调控免疫反应。免疫染色结果表明,在中枢神经系统中NRTI可以显著激活星形胶质细胞,然而小胶质细胞则没有被明显激活。确定NRTI在中枢神经系统中引起神经炎症后,我们通过HE染色进一步研究了NRTI对中枢神经系统组织病变的影响情况。组织形态学分析表明,短期使用NRTI类药物未引起海马和脊髓组织发生显著病变。近期有报道发现Wnt5a在皮层最初形成时对IL-1β和TNF-α具有重要的调节作用,我们推测引起神经炎症的NRTI诱导Wnt5a表达。通过Western blotting和免疫组织化学染色的方法检测到中枢神经系统中NRTI可明显上调Wnt5a,初步表明NRTI可能激活Wnt5a。为了进一步研究Wnt5a对NRTI诱导的神经炎症的作用,我们利用Wnt5a的特异性拮抗剂BOX5来抑制Wnt5a。Western blotting结果表明,BOX5可以显著性降低NRTI诱导的炎症因子上调。而且,免疫组织化学染色结果表明,BOX5显著性抑制了NRTI对星型胶质细胞的激活作用。综上所述,NRTI类药物导致了神经炎症,并且是通过Wnt5a信号通路介导的。
【关键词】：核苷类逆转录酶抑制剂 神经炎症 星型胶质细胞 Wnt5a
【学位授予单位】：浙江理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R96
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 缩略语9-14
• 第一章 绪论14-24
• 1. 引言14-22
• 1.1 HIV-1 研究现状14-15
• 1.2 NRTI研究现状15-17
• 1.3 神经炎症研究概况17-19
• 1.4 Wnt 5a研究进展19-22
• 2. 实验设计方案22-24
• 2.1 实验的目的和意义22-23
• 2.2 实验设计流程图23-24
• 第二章 NRTI 诱导的神经炎症研究24-44
• 1. 实验材料与试剂24-28
• 2. 实验方法28-31
• 2.1 实验分组28-29
• 2.2 实验组织的获取29
• 2.3 Western blotting检测炎症因子的表达29-31
• 3. 实验结果与分析31-42
• 3.1 NRTI对大脑皮层的炎症因子表达影响31-35
• 3.2 NRTI对海马炎症因子表达影响35-39
• 3.3 NRTI对脊髓炎症因子表达影响39-42
• 4. 讨论42-44
• 第三章 NRTI对中枢神经系统胶质细胞活性的影响44-50
• 1. 实验材料及试剂44-45
• 2. 实验方法45-47
• 2.1 实验分组45
• 2.2 实验组织的获取45-46
• 2.3 石蜡切片制备46
• 2.4 免疫组织化学染色检测胶质细胞的活化46-47
• 3. 实验结果及分析47-49
• 3.1 NRTI对星型胶质细胞活性的影响47-48
• 3.2 NRTI对小胶质细胞活性的影响48-49
• 4. 讨论49-50
• 第四章 NRTI对中枢神经系统海马和脊髓形态结构变化的影响50-53
• 1. 实验材料与试剂50
• 2. 实验方法50-51
• 2.1 实验分组50
• 2.2 实验组织获取50
• 2.3 石蜡切片制备50
• 2.4 HE染色观察海马和脊髓的形态结构50-51
• 3. 实验结果及分析51
• 3.1 海马的形态结构变化51
• 3.2 脊髓的形态结构变化51
• 4. 讨论51-53
• 第五章 NRTI对中枢神经系统Wnt5a表达的影响53-58
• 1. 实验材料与试剂53
• 2. 实验方法53-54
• 2.1 实验分组53
• 2.2 实验组织的获取53
• 2.3 Western blotting检测Wnt5a的表达53
• 2.4 免疫组织化学染色检测中枢神经系统Wnt5a变化53-54
• 3. 实验结果及分析54-57
• 3.1 NRTI对大脑皮层Wnt5a表达的影响54-55
• 3.2 NRTI对海马Wnt5a表达的影响55
• 3.3 NRTI对脊髓Wnt5a表达的影响55-56
• 3.4 免疫组织化学染色检测Wnt5a变化56-57
• 4. 讨论57-58
• 第六章 BOX5对NRTI引起神经炎症的影响58-68
• 1. 实验材料与试剂58
• 2. 实验方法58-59
• 2.0 实验分组58
• 2.1 鼻腔滴注BOX558-59
• 2.2 实验组织的获取59
• 2.3 Western blotting检测炎症因子和Wnt5a的表达59
• 2.4 免疫组织化学染色检测星型胶质细胞的活化59
• 3. 实验结果及分析59-66
• 3.1 BOX5对大脑皮层NRTI引起神经炎症的影响59-62
• 3.2 BOX5对海马NRTI引起神经炎症的影响62-64
• 3.3 BOX5对脊髓NRTI引起神经炎症的影响64-66
• 3.4 BOX5对中枢神经系统NRTI活化星型胶质细胞的影响66
• 4. 讨论66-68
• 第七章 结论68-69
• 参考文献69-75
• 致谢75

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