壳聚糖对神经毒物二氯二丁基锡诱导PC12细胞损伤的保护作用研究

发布时间：2017-05-18 04:04

  本文关键词：壳聚糖对神经毒物二氯二丁基锡诱导PC12细胞损伤的保护作用研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:二氯二丁基锡(DBT)作为化工原料被广泛应用于杀虫剂和塑料稳定剂,是一种神经高毒性化合物。壳聚糖(CS)是天然无毒的多聚糖,具有抗菌、抗真菌、抗癌、抗糖尿病、抗炎、抗氧化和神经保护等多种生物活性。本论文旨在通过体外实验研究CS对DBT诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞损伤的保护作用以及其潜在的作用机制。方法:本文首先采用MTT法、乳酸脱氢酶(LDH)释放实验及形态学观察研究CS对DBT损伤后PC12细胞的保护作用。经AO/EB荧光染色法和Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞的凋亡,流式细胞术测定细胞内活性氧(ROS)水平及线粒体膜电位(MMP)。采用实时荧光定量PCR技术测定凋亡相关蛋白m RNA的表达量,并通过western blotting进一步检测Bcl-2、Bax、caspase-9和cleaved caspase-3蛋白的表达水平。结果:CS预处理可以浓度依赖性增加DBT所引起的PC12细胞活力下降,减少DBT诱导LDH的释放和形态学的改变。与DBT处理组相比,CS能够明显减少细胞的凋亡和胞内ROS的产生,部分恢复MMP。实时荧光定量PCR实验表明,DBT导致Bcl-2和Bcl-xL的m RNA表达水平降低,同时增加Bad、Bax、cytochome-c、Apaf-1、caspase-9和caspase-3的m RNA水平,而采用CS预处理可以逆转上述基因表达的改变。在蛋白水平上,CS可以明显上调DBT所致Bcl-2/Bax比值的下降,同时降低DBT诱导的caspase-9和cleaved caspase-3的高表达。结论:CS预处理能够保护DBT诱导的PC12细胞凋亡,且这种保护作用可能是通过ROS介导的线粒体凋亡途径。
【关键词】：壳聚糖 二氯二丁基锡 神经保护 PC12细胞 线粒体凋亡途径
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R965
【目录】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 常用缩写词中英文对照表10-11
• 前言11-13
• 1 材料与方法13-19
• 1.1 细胞来源13
• 1.2 主要试剂13
• 1.3 主要仪器13-14
• 1.4 母液的配置14
• 1.5 MTT法测定细胞活力14-15
• 1.6 LDH释放实验15
• 1.7 形态学观察15
• 1.8 吖啶橙 (AO) /溴化乙锭 (EB) 荧光染色法15
• 1.9 Annexin V-FITC/PI双染法15-16
• 1.10 ROS含量的测定16
• 1.11 线粒体膜电位检测16
• 1.12 实时荧光定量PCR检测16-17
• 1.13 蛋白印记 (Western blotting)17
• 1.14 统计分析17-19
• 2 结果19-29
• 2.1 CS对PC12细胞的毒性作用19
• 2.2 CS对DBT诱导PC12毒性的保护作用19-21
• 2.3 CS对DBT诱导细胞凋亡的保护作用21-22
• 2.4 CS能降低DBT诱导PC12细胞ROS的产生和MMP的去极化22-24
• 2.5 CS对DBT诱导凋亡相关基因表达变化的影响24-28
• 2.6 CS对DBT诱导凋亡相关蛋白表达变化的影响28-29
• 3 讨论29-32
• 4 结论32-33
• 参考文献33-39
• 综述39-49
• 参考文献43-49
• 致谢49-50
• 在学期间参与的科研课题与研究成果50-51
• 个人简历51

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本文编号：375065