红芸豆植物凝集素（RKBL）终止小鼠中期妊娠作用机理的初步研究

发布时间：2017-05-22 21:00

  本文关键词：红芸豆植物凝集素（RKBL）终止小鼠中期妊娠作用机理的初步研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：凝集素是一种无免疫原性的蛋白质,广泛存在于动物、植物和微生物中。植物凝集素不仅具有凝集细胞的作用,并且参与体内一些重要的生理过程,已经广泛应用于农业、畜牧业及医药等行业。凝集素受体是存在于细胞膜表面的糖蛋白或糖脂,可以与相应的凝集素发生特异性的结合。许多实验证据表明,凝集素受体在受精、妊娠等生殖过程中有具有重要的影响和作用。芸豆植物凝集素(kidney bean lectin,KBL)是从芸豆中提取的糖蛋白,其特异性结合糖为β-半乳糖、α-甘露糖和α-乙酰葡萄糖胺。本实验室以往的研究发现KBL具有抑制受精、终止不同时期妊娠的作用,但对其机理还缺乏较为系统和全面的研究。因此,本研究从整体、组织、细胞及分子水平进行了一些相关的研究。目的:探究KBL在终止小鼠妊娠过程中对相关性激素、胎盘和子宫的影响,为研究KBL终止妊娠的机制提供实验依据。同时,考虑将来的临床应用,也研究了不同性别的小鼠对KBL的耐受性。以期为生殖医学和研究新型避孕药提供基础实验依据。方法:1、通过非手术法子宫给药的方式观察红芸豆植物凝集素(Red kidney bean lectin,RKBL)在终止昆明小鼠妊娠过程中对生殖内分泌激素的影响。2、对RKBL处理的小鼠胎盘进行形态学观察、台盼蓝染色、甲基绿-派诺宁染色、DNA电泳、TUNEL检测,8-异前列腺素F2α的测定,了解RKBL在终止小鼠妊娠过程中对胎盘的影响。3、通过测定并比较培养乳酸菌和盘基网柄菌前后的培养基中RKBL的凝集活性和分子的完整性。4、选用经口(限量试验)和经腹腔(LD50测定)两种方式对RKBL进行了急性毒性试验。结果:1、在性激素变化方面,应用RKBL终止妊娠过程中孕鼠血清中E2、FSH、LH和T无明显变化;P和PRL在注射RKBL后呈先升高后降低的趋势,并且在对照组与实验组间差异显著;胎盘匀浆的8-iso-PGF2α水平无明显变化,而子宫匀浆8-iso-PGF2α水平在给药后明显下降。2、在组织水平,RKBL可导致妊娠小鼠胎盘出现充血和坏死的现象,胎盘边缘有明显台盼蓝染色;3、在细胞和分子水平,甲基绿-派诺宁染色与TUNEL检测、DNA电泳条带显示胎盘出现坏死和凋亡现象;4、在作用方式上,RKBL在促进乳酸菌和盘基网柄菌增殖的同时其凝集活性和含量不会降低。5、不同性别的急性毒性试验结果表明,腹腔单次注射RKBL,雌鼠LD50为743.242 mg/kg,其95%可信区间为658.053~848.953 mg/kg;雄鼠LD50为535.452 mg/kg,其95%可信区间为480.961~598.818 mg/kg;限量试验结果大于5000 mg/kg。结论:1、使用RKBL终止小鼠中期妊娠时不改变孕鼠体内的E2、FSH、LH、T和8-异前列腺素F2α水平,而对P和PRL有较大影响,提示RKBL终止小鼠妊娠不是通过影响整体神经内分泌轴(下丘脑-垂体-靶腺轴)的下丘脑及垂体水平而实现。2、注射RKBL后引起小鼠胎盘坏死、凋亡或副凋亡,提示RKBL终止妊娠主要是通过引起胎盘坏死、凋亡或副凋亡途径实现的。3、RKBL能够在细胞外促进乳酸菌和盘基网柄菌增殖,且这种增殖作用主要是通过细胞外信号传递方式,RKBL本身不会作为能源物质被利用或降解。4、RKBL的属于低毒,对不同性别的昆明小鼠具有量效作用差异。单次腹腔注射RKBL,雌鼠的耐受性高于雄鼠。
【关键词】：红芸豆植物凝集素 小鼠 终止妊娠 机理 性别 毒性
【学位授予单位】：云南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R965
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-8
• 缩略词表8-13
• 第1章 引言13-30
• 1.1 研究的目的与意义13
• 1.2 问题的提出13
• 1.3 选题背景13-14
• 1.4 文献综述14-28
• 1.4.1 植物凝集素概述14-21
• 1.4.1.1 植物凝集素的发现与定义14
• 1.4.1.2 植物凝集素的结构14-16
• 1.4.1.3 植物凝集素的分类16-19
• 1.4.1.4 植物凝集素的特性19-21
• 1.4.2 植物凝集素的毒性21-22
• 1.4.3 植物凝集素的应用22-27
• 1.4.3.1 植物凝集素与植物体22-23
• 1.4.3.2 植物凝集素在生物学研究中的作用23
• 1.4.3.3 植物凝集素在医学研究中的作用23-25
• 1.4.3.4 植物凝集素与生殖25-26
• 1.4.3.5 植物凝集素的抗HIV特性26-27
• 1.4.4 植物凝集素的作用机理27-28
• 1.5 论文结构安排28-30
• 第2章 红芸豆植物凝集素终止小鼠中期妊娠中的相关生殖激素变化研究30-39
• 2.1 材料与方法30-31
• 2.1.1 试剂30-31
• 2.1.2 实验动物31
• 2.1.3 实验仪器31
• 2.2 实验方法31-32
• 2.2.1 孕鼠的建立31
• 2.2.2 分组及给药方法31
• 2.2.3 取材31-32
• 2.2.4 检测与分析32
• 2.2.5 统计学方法32
• 2.3 结果32-36
• 2.3.1 两组妊娠结局比较32
• 2.3.2 激素水平比较32-36
• 2.4 讨论36-39
• 第3章 RKBL终止小鼠中期妊娠的部分细胞及分子机理研究39-50
• 3.1 实验材料39-40
• 3.1.1 试剂39-40
• 3.1.2 实验动物40
• 3.1.3 实验仪器40
• 3.2 实验方法40-41
• 3.2.1 孕鼠的建立40
• 3.2.2 给药40
• 3.2.3 取材40
• 3.2.4 检测与分析40-41
• 3.2.4.1 子宫及胎盘台盼蓝染色41
• 3.2.4.2 孕鼠子宫及胎盘核酸电泳41
• 3.2.4.3 孕鼠子宫及胎盘甲基绿-派诺宁染色41
• 3.2.4.4 胎盘的TUNEL检测41
• 3.2.4.5 子宫、胎盘及血清 8-异前列腺素F2_α测定41
• 3.3 结果41-48
• 3.3.1 妊娠结局41-42
• 3.3.2 染色结果42-44
• 3.3.3 TUNEL检测结果44-45
• 3.3.4 电泳结果45-46
• 3.3.5 8-异前列腺素检测结果46-48
• 3.4 讨论48-50
• 第4章 RKBL作用方式的研究——以乳酸菌和盘基网柄菌为模式生物50-65
• 4.1 RKBL对乳酸菌作用机理的初步研究50-56
• 4.1.1 材料与方法50-53
• 4.1.1.1 材料50-51
• 4.1.1.2 试剂与仪器51
• 4.1.1.3 培养基的配制51-52
• 4.1.1.4 乳酸菌的活化传代及接种扩培52
• 4.1.1.5 方法52-53
• 4.1.2 结果53-56
• 4.2 RKBL对盘基网柄菌作用机理初步研究56-62
• 4.2.1 材料与方法56-59
• 4.2.1.1 材料56-57
• 4.2.1.2 培养基的配制57-58
• 4.2.1.3 实验方法58-59
• 4.2.2 结果59-62
• 4.3 讨论62-63
• 4.4 结论63-65
• 第5章 红芸豆凝集素急性毒性研究65-72
• 5.1 实验材料65
• 5.1.1 药品65
• 5.1.2 实验动物65
• 5.2 实验方法65-66
• 5.2.1 分组65-66
• 5.2.1.1 LD_(50)测定65-66
• 5.2.1.2 限量试验66
• 5.2.2 给药66
• 5.2.2.1 LD_(50)测定66
• 5.2.2.2 限量试验66
• 5.2.3 观察与统计66
• 5.3 实验结果66-70
• 5.3.1 LD_(50)测定结果66-70
• 5.3.2 限量试验结果70
• 5.4 讨论70-72
• 第6章 结论72-74
• 6.1 RKBL终止小鼠中期妊娠中的相关生殖激素变化72
• 6.2 RKBL终止小鼠中期妊娠的部分细胞及分子机理72
• 6.3 RKBL作用方式的研究——以乳酸菌和盘基网柄菌为模式生物72-73
• 6.4 RKBL的急性毒性试验73-74
• 参考文献74-83
• 攻读学位期间发表的学术论文和研究成果83-84
• 致谢84

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 张丽芬;王昌梅;杨明洁;张田;王敏康;;芸豆植物凝集素对小鼠体外受精的影响[J];中国计划生育学杂志;2011年02期

2 崔贞福,吴孟超,虞紫茜,张世民,殷正丰;内源性凝集素介导的MTX-拟糖蛋白对肝癌细胞的靶向杀伤作用[J];中国肿瘤生物治疗杂志;1997年03期

3 刘慧慧,李太武,苏秀榕;植物凝集素及其在生殖细胞表面糖复合物检测中的应用[J];自然杂志;2003年06期

  本文关键词：红芸豆植物凝集素（RKBL）终止小鼠中期妊娠作用机理的初步研究，由笔耕文化传播整理发布。

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