全天麻胶囊及天麻素联合卡马西平抗癫痫机制研究

发布时间：2017-05-23 06:23

  本文关键词：全天麻胶囊及天麻素联合卡马西平抗癫痫机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的 考察全天麻胶囊及天麻素联合卡马西平对青霉素诱导的癫痫大鼠抑制作用；研究天麻素与卡马西平在青霉素诱导的癫痫大鼠体内药动学之间的相互影响；通过免疫组化和Western-blot方法研究全天麻胶囊及天麻素联合卡马西平,对癫痫大鼠海马体P-gP表达的影响；通过实时定量荧光PCR研究全天麻胶囊及天麻素联合卡马西平,对癫痫大鼠海马体中MDR1和Abcc1基因表达的影响。 方法 1、将SD大鼠分为6组,每组6只,分别为空白对照组,卡马西平组、卡马西平联合全天麻胶囊组、卡马西平联合天麻素组、全天麻胶囊组、天麻素组。空白对照组大鼠给予生理盐水,其它各组给予对应药物,每日一次,连续给药7天,腹腔注射720万单位/kg青霉素,连续2h观察各组大鼠癫痫发作情况,并记录发作的等级、持续时间,潜伏时间,死亡率。 2、将青霉素诱导癫痫SD大鼠分为5组,每组18只,即为卡马西平组、卡马西平联合全天麻胶囊组、卡马西平联合天麻素组、全天麻胶囊组、天麻素组,在灌胃第一天、第七天、第十五天,在各组大鼠中随机选取6只大鼠,在规定的时间点采集血样和脑组织,处理后用HPLC分析血药浓度和脑药浓度,用DAS2.0药动学软件计算各组大鼠药动学参数。 3、将青霉素诱导癫痫SD大鼠分为6组,每组18只,分别为空白模型对照组,卡马西平组、卡马西平联合全天麻胶囊组、卡马西平联合天麻素组、全天麻胶囊组、天麻素组,另选取正常组大鼠6只为空白对照组,给予生理盐水和相对应的药物灌胃处理,在灌胃第一天、第七天、第十五天,在各组大鼠中随机选取6只,用规定的方法处理,分离大鼠海马体,进行免疫组化、wetern-blot、实时定量荧光PCR和普通病理学分析。结果 1、卡马西平联合全天麻胶囊及天麻素对青霉素诱导的癫痫大鼠的发作级别、潜伏时间、持续时间、死亡率均有显著影响,联合组优于单用组,研究发现联合全天麻胶囊组比联合天麻素组抑制效果更加明显,全天麻胶囊组、天麻素组较卡马西平组抑制效果差,其中全天麻胶囊组抑制效果优于天麻素组。 2、全天麻胶囊及天麻素对卡马西平体内药动学参数有影响,卡马西平对天麻素的体内血药药动学数据有影响。随着给药天数的增加,卡马西平最大血药浓度和脑药浓度呈下降趋势,联合应用全天麻胶囊后这种下降趋势减弱。卡马西平脑内浓度受全天麻胶囊影响,天麻素脑内浓度不受卡马西平影响。 3、灌胃给予卡马西平,青霉素诱导的癫痫大鼠海马体P-糖蛋白表达量增加,联合应用全天麻胶囊组,P-糖蛋白表达较卡马西平组、天麻素组降低；普通病理学研究发现,卡马西平对于青霉素诱导的癫痫大鼠损伤细胞无修复作用,联合应用全天麻胶囊后,修复作用明显,天麻素无修复作用。 4、癫痫大鼠海马体P-gp表达较正常大鼠增加；随着给药时间增加,卡马西平组、天麻素组及两者合用组,P-gp表达增加,天麻素诱导P-gp表达增加明显弱于卡马西平,加入全天麻胶囊后,P-gp的表达增加的趋势明显减弱。 5、随着给药时间增加,卡马西平组、卡马西平联合天麻素组、天麻素组MDR1a基因表达增加,给药第七天,MDR1b基因下降,在第十五天,增加。全天麻胶囊调低MDR1a及MDR1b基因,天麻素则调高MDR1a及MDR1b基因水平。随着给药时间的增加各组MRP1/Abcc1基因表达上调,卡马西平组上调显著。 结论 全天麻胶囊及天麻素联合卡马西平,对青霉素诱导的癫痫大鼠有显著抑制作用,抑制效果较卡马西平组好；全天麻胶囊及天麻素对卡马西平的药动学数据有影响,可促进卡马西平在大鼠体内分布。全天麻胶囊对青霉素诱导的癫痫大鼠海马体损伤细胞有修复作用。全天麻胶囊能影响海马体中P-gp的表达,及MDR1和MRP1/Abcc1基因表达。这对研究抗癫痫中药作用机制,提供新的思路和理论支撑。
【关键词】：卡马西平 全天麻胶囊 天麻素 青霉素 癫痫模型 P-GP 药代动力学 Western-blot 实时定量荧光PCR 免疫组织化学法
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R742.1;R965
【目录】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-12
• 引言12-18
• 1 多药耐药研究进展12-14
• 2 中医药治疗癫痫研究进展14-16
• 3 中西药联合治疗癫痫研究进展16-18
• 第二章 立题依据与研究内容18-22
• 2.1 立题依据18-20
• 2.2 研究内容20-22
• 第三章 全天麻胶囊及天麻素联合应用卡马西平对青霉素所致癫痫模型小鼠的抑制作用22-25
• 1 材料与方法22
• 1.1 材料22
• 2 方法22-23
• 2.1 分组23
• 2.2 给药23
• 2.3 造模23
• 2.4 癫痫模型发作等级评判23
• 2.5 统计学处理23
• 3 实验结果23-24
• 3.1 对癫痫模型的抑制作用结果23-24
• 4 讨论24-25
• 第四章 全天麻胶囊及天麻素联合应用卡马西平的药动学25-40
• 1 材料及方法25-26
• 1.1 实验动物25
• 1.2 实验药物25
• 1.3 实验仪器25-26
• 2 实验方法26-27
• 2.1 分组26
• 2.2 造模26
• 2.3 给药方法26
• 2.4 样品采集26-27
• 3 HPLC法测定大鼠血液及脑组织中天麻素及卡马西平方法学考察27-30
• 3.1 色谱条件27
• 3.2 大鼠血液前处理27
• 3.3 大鼠脑组织前处理27
• 3.4 对照品溶液的制备27-28
• 3.5 线性关系考察28-29
• 3.6 方法专属性29
• 3.7 精密度29-30
• 3.8 加样回收率30
• 3.9 统计学分析软件30
• 4 结果30-38
• 4.1 HPLC法测定大鼠血液及脑组织中天麻素及卡马西平方法学考察结果31-38
• 5 讨论38-40
• 第五章 免疫组织化学法检测全天麻胶囊及天麻素联合应用卡马西平对于青霉素诱导的癫痫大鼠海马体P-糖蛋白表达的影响及普通病理学检查40-52
• 1 实验材料和试剂40-41
• 1.1 实验动物40
• 1.2 实验药物及试剂40
• 1.3 实验仪器40-41
• 2 实验方法41-42
• 2.1 实验分组41
• 2.2 造模41
• 2.3 给药方法41
• 2.4 标本采集41-42
• 3 免疫组织化学法检测全天麻胶囊及天麻素联合应用卡马西平对于青霉素诱导的癫痫大鼠海马体P-糖蛋白表达的影响42-44
• 3.1 石蜡片的制备42-43
• 3.2 海马体组织免疫组织化学染色43
• 3.3 结果判定43
• 3.4 统计学分析43-44
• 4 病理学检查44
• 5 结果44-52
• 5.1 大鼠海马体免疫组织化学法检查结果44-46
• 5.2 p-gp阳性产物在各组大鼠海马体内的表达的光密度平均值46-48
• 5.3 病理学检查结果48-52
• 第六章 蛋白免疫印迹法检测全天麻胶囊及天麻素联合应用卡马西平对于青霉素诱导的癫痫大鼠海马体P-糖蛋白表达的影响52-59
• 1 实验材料和方法52-53
• 1.1 实验动物52
• 1.2 实验药品及试剂52-53
• 1.3 相关试液配置53
• 1.4 实验仪器53
• 2 实验方法53-56
• 2.1 实验分组53
• 2.2 造模53
• 2.3 给药方法53-54
• 2.4 标本采集54
• 2.5 蛋白质的提取54-55
• 2.6 蛋白质聚丙烯酰胺电泳55-56
• 3 结果56-58
• 3.1 各组大鼠海马体P-gp表达Western blot图谱56
• 3.2 各组大鼠海马体P-gp表达量56-58
• 4 讨论58-59
• 第七章 全天麻胶囊及天麻素与卡马西平联用后对于青霉素诱导的癫痫大鼠海体多药耐药基因MDR1和Abcc1表达的影响59-67
• 1 实验材料和方法59-60
• 1.1 实验动物59
• 1.2 实验药品及试剂59
• 1.3 实验仪器59-60
• 2 实验方法60-63
• 2.1 实验分组：同实验第六章60
• 2.2 造模：同实验第六章60
• 2.3 给药方法：同实验第六章60
• 2.4 标本采集：同实验第六章60
• 2.5 组织总RNA提取60
• 2.7 实时定量PCR实验60-63
• 3 结果63-67
• 3.1 荧光实时定量PCR检测MDR1基因表达结果63-65
• 3.2 荧光实时定量PCR检测Abcc1基因表达结果65-67
• 4 讨论67
• 参考文献67-71
• 研究结论71-72
• 在学期间的研究成果72-73
• 致谢73

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：387047