凝集素修饰的苦参碱纳米粒对人结肠癌细胞HT29的作用评价

发布时间：2017-05-23 06:31

  本文关键词：凝集素修饰的苦参碱纳米粒对人结肠癌细胞HT29的作用评价，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:本课题选择前期研究制备的凝集素修饰的苦参碱纳米粒(WGA-MT-NPS)作为研究对象,利用凝集素对癌细胞的特异性亲和作用,对结肠癌HT29细胞的作用进行评价,了解WGA-MT-NPS对癌细胞的作用机理,为口服结肠癌生物黏附靶向给药系统的研究奠定基础。方法:(1)WGA-MT-NPS的制备表征及凝集活性考察制备WGA-MT-NPS,以粒径、粒度分布、电位对其进行评价,并考察凝集素修饰在苦参碱纳米粒上之后的活性变化。(2)WGA-MT-NPS对结肠癌HT29细胞增殖的影响采用四唑盐比色法(MTT),以OD值为指标研究MT-NPS用WGA修饰前后对结肠癌HT29细胞的细胞增殖的抑制作用。(3)WGA-MT-NPS对结肠癌细胞HT29凋亡的影响采用Annexin V-FITC/PI双染法,利用流式细胞仪考察各组MT-NPS与WGA-MT-NPS对HT29细胞凋亡的影响,并利用Flow Jo软件进行分析。(4)WGA-MT-NPS对结肠癌细胞HT29细胞周期的影响采用PI染色法,利用流式细胞仪考察各组MT-NPS与WGA-MT-NPS对HT29细胞周期的影响,并利用ModFit软件进行分析。(5)WGA-MT-NPS对结肠癌细胞HT29和人正常结肠上皮细胞NCM460的不同亲和作用研究用fWGA-MT-NPS分别作用于HT29细胞和NCM460细胞,利用荧光染料染色,在共聚焦显微镜下观察药物与两种细胞的亲和作用情况。结果:按照最佳工艺制备出的三批MT-NPS粒径分别为102.6nm、104.6nm和101.6nm,电位分别为-17.5mV、-12.2mV、-12.5 mV,三批WGA-MT-NPS粒径分别为234.7nm、235.1nm和231.9nm电位分别为-9.51mV、-7.85mV、-7.54 mV,经考察WGA修饰在MT-NPS上后,凝集素的凝血活性没有发生变化;WGA-MT-NPS相对于HT29癌细胞增殖的抑制作用更强,且有明显的量效关系;相同含药浓度下WGA-MT-NPS相对于MT-NPS,结肠癌细胞HT29的凋亡率更高;药物将细胞周期阻滞在G0/G1期,阻碍了细胞DNA的合成,且WGA-MT-NPS比MT-NP G0/G1期有更高的细胞量;共聚焦显微镜下观察发现,结肠癌细胞HT29视野中的绿色荧光强度明显强于人正常结肠上皮细胞NCM460。结论:WGA对纳米粒修饰后,仍保持了其特异糖基结合活性;WGA-MT-NPS对HT29细胞增殖的抑制作用比MT-NPS更强,并具备更强的促进其凋亡作用和细胞周期阻滞作用;HT29细胞对WGA-MT-NPS的摄取明显强于正常结肠上皮细胞NCM460。说明WGA对MT-NPS修饰后具有较为明显的结肠癌细胞靶向性和选择性杀伤作用。
【关键词】：麦胚凝集素 HT29细胞 细胞增殖 流式细胞仪 激光共聚焦显微镜
【学位授予单位】：河南中医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R943;R96
【目录】：

• 摘要7-8
• Abstract8-10
• 前言10-12
• 第一章 苦参碱纳米粒和凝集素修饰的苦参碱纳米粒的制备表征及凝集活性考察12-20
• 1. 实验仪器、试剂和材料12-13
• 1.1 实验仪器12
• 1.2 实验试剂12-13
• 1.3 实验材料13
• 2. 苦参碱纳米粒（MT-NPS）的制备与表征13-16
• 2.1 MT-NPS的制备方法13
• 2.2 MT-NPS的表征13-15
• 2.3 MT-NPS的包封率和载药量的测定15-16
• 3. 凝集素修饰的苦参碱纳米粒（WGA-MT-NPS）的制备与表征16-18
• 3.1 WGA-MT-NPS的制备方法16
• 3.2 WGA-MT-NPS的表征16-18
• 3.3 WGA对MT-NPS修饰率的测定18
• 4. 麦胚凝集素修饰后凝集活性考察18-20
• 第二章 结肠癌细胞HT29生长曲线的测定及WGA-MT-NPS对其增殖的影响20-33
• 1. 实验仪器、试剂和材料20-21
• 1.1 实验仪器20
• 1.2 实验试剂20-21
• 1.3 实验材料21
• 2. HT29细胞的培养21-24
• 2.1 试剂配制21
• 2.2 HT29细胞培养常规观察21
• 2.3 HT29细胞悬液的制备21-22
• 2.4 HT29细胞传代22
• 2.5 HT29细胞冻存22
• 2.6 HT29细胞复苏22-23
• 2.7 HT29细胞计数23-24
• 3. 结肠癌细胞HT29生长曲线的测定24-27
• 3.1 实验方法24-25
• 3.2 实验结果25-27
• 4. WGA-MT-NPS对结肠癌细胞HT29增殖的影响27-33
• 4.1 实验方法27-29
• 4.2 实验结果29-33
• 第三章 WGA-MT-NPS对结肠癌细胞HT29凋亡的影响33-39
• 1. 实验仪器、试剂和材料33-34
• 1.1 实验仪器33
• 1.2 实验试剂33-34
• 1.3 实验材料34
• 2. 实验方法34-35
• 2.1 WGA-MT-NPS对结肠癌细胞HT29凋亡的影响34
• 2.2 实验步骤34-35
• 3. 实验结果35-39
• 第四章 WGA-MT-NPS对结肠癌细胞HT29周期的影响39-47
• 1. 实验仪器、试剂和材料39-40
• 1.1 实验仪器39
• 1.2 实验试剂39
• 1.3 实验材料39-40
• 2. 实验方法40-41
• 2.1 WGA-MT-NPS对结肠癌细胞HT29周期的影响40
• 2.2 实验步骤40-41
• 3. 实验结果41-47
• 第五章 WGA-MT-NPS对结肠癌细胞HT29和人正常结肠上皮细胞NCM460的不同亲和作用研究47-53
• 1. 实验仪器、试剂和材料47-48
• 1.1 实验仪器47
• 1.2 实验试剂47-48
• 1.3 实验材料48
• 2. 实验内容48-53
• 2.1 FITC标记麦胚凝集素修饰苦参碱纳米粒（f WGA-MT-NPS）的制备49
• 2.2 fWGA-MT-NPS与细胞作用时间筛选49-51
• 2.3 WGA-MT-NPS对结肠癌细胞HT29和人正常结肠上皮细胞NCM460的不同亲和作用研究51-53
• 结果与讨论53-55
• 致谢55-56
• 参考文献56-59
• 附录1 文献综述59-66
• 参考文献63-66
• 附录2 论文发表情况66

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 詹海勇;詹琼;詹冬雪;李国平;黄聪武;;结肠癌患者血浆瘦素水平与临床病理分期及体质指数的关系[J];广东医学;2013年14期

2 聂家艳;黄杰安;唐国都;刘诗权;;舒林酸对人结肠癌细胞凋亡及相关基因表达谱的作用[J];世界华人消化杂志;2008年25期

3 林兰;刘建文;;胸腺肽制剂及临床应用研究现状[J];中国药事;2009年07期

4 高硕徽;赵吉生;李畅;苏妍卓;;LIMK1/Cofilin在瘦素诱导的结肠癌SW620细胞迁移中的作用[J];中国老年学杂志;2011年06期

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本文编号：387095