吉林省洮南市中药资源调查及硬毛粗盖孔菌的生药学研究

发布时间：2020-03-18 01:35

【摘要】：通过全国第四次中药资源普查对洮南市中药资源进行了系统性整理,并在普查过程中发现了蕴藏量较大的硬毛粗盖孔菌,本文对其进行了生药学研究。第一篇综述部分,通过查阅资料对全国性中药资源普查以及洮南市中药资源现状进行了阐述,同时对硬毛粗盖孔菌所在属及其近缘属进行了化学成分、药理作用和驯化栽培技术的综述。第二篇研究内容分为六部分,即洮南市中药资源调查报告;硬毛粗盖孔菌子实体的菌种鉴定;硬毛粗盖孔菌的无机元素含量和粗多糖含量的测定;硬毛粗盖孔菌的化学成份分离及鉴定;硬毛粗盖孔菌子实体提取物抑制H22荷瘤小鼠肿瘤活性研究;硬毛粗盖孔菌驯化栽培的研究。第一章,通过第四次中药资源普查对洮南市的药用植物(菌物)资源进行了为期三年的实地调查研究,采用全球定位系统(GPS)和样地调查相结合的方式获取相关资料,掌握当地野生药物资源情况,对其药用植物(菌物)多样性进行了研究,并对如何开发利用中药资源提出了建议。本次野外调查研究共采集鉴定出洮南市野生药用植物235种,隶属于49科,其中,国家重点调查品种41种,隶属20科;国家普遍调查品种139种,隶属于34科;省重点调查品种41种,隶属于29科;省次重点调查品种14种,隶属于8科。首次对洮南市的药用真菌种类进行了记录,共17种。同时采集到蕴藏量较大的一种野生菌物资源,对其进行下一步研究。第二章,结合普查过程中采集的野生菌子实体的形态特征,通过ITS测序后,利用GenBank BLAST(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)进行比对,得出结论该菌种为担子菌亚门、非褶菌目、多孔菌科、粗盖孔菌属、硬毛粗盖孔菌。第三章,对野外采集的硬毛粗盖孔菌子实体进行了无机元素含量和粗多糖含量的测定,为硬毛粗盖孔菌的营养评价和安全性评价提供科学依据。实验结果表明:野生硬毛粗盖孔菌子实体的营养价值较高,多糖含量为7.82±1.28%;通过对无机元素含量测定结果的分析,该菌具有一定的营养价值。第四章,对硬毛粗盖孔菌的子实体进行了化学成份分离及鉴定,分离出5种化合物,其中1-甲基-18-乙基-9-烯-1,18-二酯、24R-5α,8α-过氧化麦角甾-6,22-二烯-3β-醇、9,12-十八烷二烯酸甲酯、木蜡酸、22E,24R-麦角甾-7,22-二烯-3β-醇均为首次在硬毛粗盖孔菌中分离得到,并对硬毛粗盖孔菌石油醚提取物进行了GC-MS分析,结果显示石油醚提取物中含有麦角甾-5,24(28)-烯-3-酮、豆甾醇、6-去氢黄体酮等28种化合物。第五章,对硬毛粗盖孔菌子实体不同提取物的抗肿瘤活性进行筛选。通过建立H22荷瘤小鼠肿瘤移植模型,研究硬毛粗盖孔菌子实体的石油醚提取物、二氯甲烷提取物、乙酸乙酯提取物、甲醇提取物以及水提取物等五种提取物的高、中、低剂量组对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用,并对H22荷瘤小鼠进行抑瘤率、体质量、胸腺指数、脾脏指数、肝脏指数、肾脏指数进行了考察。对小鼠肿瘤、脾脏、肾脏进行了组织病理学检查,对血清中的细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ及TNF-α的含量进行测定。结果表明:各组分均有抑瘤效果,其中乙酸乙酯提取物中剂量组(1000mg/kg)抑瘤效果最佳与阴性对照组比较有极显著差异(P0.01),并且这组的H22荷瘤小鼠血清中IL-2的含量显著增加,同时肿瘤细胞通过HE染色后,可观察到出现坏死面积增大,与抑制肿瘤活性具有相关性。第六章,本研究利用单因素试验对温度、秸秆与杨树比例、料水比进行了筛选。最后通过正交试验选出秸秆利用率最大、发酵速度最快的条件。并首次通过固体发酵培育出硬毛粗盖孔菌的子实体。通过试验得到硬毛粗盖孔菌子实体最优培养条件为:温度35℃、秸秆:杨树=5:5、料水比2:5。
【图文】：

代表区,位置,情况,拉丁名

■阔叶林■草甸■草原■样方套■样地■沼泽■县边界图 1.1 代表区域调查位置情况Fig.1.1 Investigation on the representative area location1.3 中药材种类鉴定整理为期 4 年的调查我们共采集药用植物 235 种（附录 A），隶属于 49 科，其中，国重点调查品种 41 种，隶属 20 科；国家普遍调查品种 139 种，隶属于 34 科；省重点调品种 41 种，隶属于 29 科；省次重点调查品种 14 种，隶属于 8 科。详见表 1-1。采集药菌物 17 种（附录 A），蕴藏量较大的野生菌种 2 种，详见表 1-2。药用植物拉丁名参照《北植物检索表》[63]和《中国长白山植物志》[64]。菌物拉丁名参考《多彩的蘑菇世界》[6和《中国真菌总汇》[66]。鉴定后的植物标本存入吉林农业大学中药材学院，为科研教提供基础性研究资料。其中与《洮南市志》[59]（1988-2000）相比，首次对真菌种类进记录。

菌子,实体,杨树,担子菌

针对大型真菌的鉴定方法从最初的形态学鉴定到近几年分子生物学鉴定方法的过程，使真菌的鉴定结果更加科学和客观。真菌核糖体基因的 ITS 区域有很多种扩增引物，其中ITS1、ITS2、ITS4、ITS5可用于大多数子囊菌和担子菌[67]；ITS1-F和 ITS4-B是能显著提高真菌和担子菌特异性的的特异引物[68]。2015 年 7 月，在进行洮南中药资源普查过程中，在杨树林中的杨树桩上发现了大量的野生菌，经初步鉴定为多孔菌科粗毛盖菌属药用菌，疑似硬毛粗盖孔菌，为了进一步对其化学成份分析、药理活性及其子实体驯化栽培等进行研究，，我们对该菌进行了分类学及分子生物学的鉴定。2.1 试验材料、仪器与试剂2.1.1 试验材料2015 年 7 月采集于吉林省洮南市杨树树桩上（E122°27′35.72″,N45°03′54.31″,海拔165.4）（图 2.1），经子实体组织分离后得到菌丝体，保存于吉林农业大学食药用菌工程中心。
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R281.4

【参考文献】