淫羊藿苷诱导小鼠黑色素瘤B16细胞分化及周期阻滞的分子机制研究

发布时间：2020-03-19 09:12

【摘要】：目的:研究淫羊藿苷对小鼠黑色素瘤B16细胞分化及周期的影响,并进一步探讨其相关的分子机制。方法:MTT法检测不同浓度淫羊藿苷(ICA)对B16细胞增殖的影响;镜下观察B16细胞经不同浓度ICA处理后细胞形态的变化;集落形成实验检测不同浓度ICA对B16细胞的集落形成能力的影响;细胞划痕实验和Transwell小室迁移实验观察ICA对B16细胞迁移能力的影响;比色法检测不同浓度ICA作用于B16细胞后,对细胞黑色素含量以及酪氨酸酶活性的影响;通过流式细胞仪检测ICA对B16细胞周期的影响;RT-qPCR检测酪氨酸酶相关基因Tyr、Trp 1及Trp 2的表达;Western blot检测分化和周期相关蛋白及MAPK通路相关蛋白MITF、Cyclin A、CDK2、p21、Erk1/2、p-Erk1/2、p38、p-p38、JNK 以及 p-JNK 的表达。结果:ICA能明显抑制B16细胞的增殖,且呈浓度及时间依赖性;随着药物浓度的增加,B16细胞体积逐渐增大变成梭形,呈现树突网状结构且细胞数量减少。同时,ICA可明显抑制B16细胞集落形成能力,而且随着药物作用浓度的增加或者药物作用时间的延长,与对照组相比,淫羊藿苷可以呈浓度与时间依赖性的抑制B16细胞的迁移能力。进一步研究发现,ICA处理后的B16细胞的黑色素含量与酪氨酸酶活性明显增加,呈浓度依赖性;Tyr、Trp 1及Trp 2的mRNA表达,以及MITF的蛋白表达明显增加。另外,经流式细胞技术检测发现,B16细胞经不同浓度ICA处理后,G0/G1期细胞分布比率增加,G2/M期与S期细胞分布比率下降,表明细胞周期阻滞在G0/G1期;同时,Westernblot检测发现,周期相关蛋白Cyclin A、CDK2和p21的表达均降低。MAPK通路相关蛋白Erk1/2、p-Erk1/2、p38、p-p38 以及 p-JNK 的表达下降。结论:研究结果表明ICA可能通过抑制MAPK通路相关蛋白Erk1/2、p-Erk1/2、p38、p-p38以及p-JNK的表达,促进MITF蛋白及酪氨酸酶相关基因Tyr、Trp1和Trp 2的表达,从而提高黑色素含量与酪氨酸酶活性,同时,ICA能抑制细胞周期相关蛋白Cyclin A、CDK2和p21的表达,导致细胞周期阻滞在G0/G1期,因此,ICA诱导B16细胞分化与周期阻滞。
【图文】：

淫羊藿苷处理后，与正常对照组相比，我们发现淫羊藿苷处理组对Ｂ１６细胞增逡逑殖具有明显的抑制作用，而且随着药物作用浓度的增加与药物处理时间的延长，逡逑淫羊藿苷对细胞增殖的抑制率明显升高，呈现浓度与时间的依赖性。如图１所逡逑示，淫羊藿苷作用于Ｂ１６细胞２４ｈ后，其细胞增殖抑制率分别为１２．８０±３．３３％、逡逑２３．５１±３．９０°／0、４２．５５±７．１０°／。、５５．９６±５．６２°／0和邋６７．８４±１．０７％；而作用邋４８ｈ邋后，其细逡逑胞增殖抑制率分别为邋２２．９３±４．５３°／。、４６．３５±４．７８％、６６．３２±２．６４％、７７．９７±５．０７％和逡逑８５．３０±３．１４％，说明淫羊藿苷可有效抑制Ｂ１６细胞的增殖，并且呈现浓度与时间的逡逑７逡逑

和１００邋Ｍｍ0ｌ／Ｌ）的淫羊藿苷培养基培养１４邋ｄ后，可以看出经过淫羊藿苷处理的Ｂ１６逡逑细胞集落数与集落形成率均明显低于未经药物处理的对照组的Ｂ１６细胞集落数与逡逑集落形成率（图２Ａ－Ｂ），，这些实验结果与上述ＭＴＴ实验结果相一致，进一步证实逡逑了淫羊藿苷对Ｂ１６细胞的增殖具有明显的抑制作用，并且呈现浓度依赖性。逡逑８逡逑
【学位授予单位】：滨州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

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本文编号：2590029