葛根素对高糖诱导RSC96细胞凋亡和自噬的影响

发布时间：2020-03-21 19:17

【摘要】：目的:通过高糖诱导损伤RSC96细胞,建立糖尿病周围神经病变的细胞模型,采用中药葛根的有效成分葛根素进行干预,观察葛根素治疗前后凋亡、自噬相关蛋白的表达情况,旨在探讨葛根素对高糖诱导的RSC96细胞凋亡和自噬的影响及其作用机制。方法:实验用RSC96细胞株购自ATCC细胞库,建立体外RSC96细胞高糖损伤模型,采用蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)方法检测Cleaved Caspase-3蛋白表达情况判定造模成功后,确定造模用葡萄糖浓度为400 mmol.L~(-1)。采用CCK-8法确定葛根素干预浓度为0.5mmol.L~(-1),之后随机分为空白对照组、高糖组、葛根素干预组。其中空白对照组不添加任何药物;高糖组:正常培养48h后,加400 mmol.L~(-1)高糖孵育1 h;葛根素干预组:正常培养48h后,用0.5mmol.L~(-1)的葛根素预处理RSC96细胞15min,随后加400 mmol.L~(-1)的高糖孵育1 h。采用CCK-8法观察细胞存活率;免疫细胞化学法检测Beclin-1蛋白的表达;WB检测Cleaved Caspase-3、LC3-II、p62、Beclin-1蛋白的表达。结果:与高糖组相比,葛根素预处理可显著提高高糖诱导后的RSC96细胞存活率(P0.05),抑制Cleaved Caspase-3、LC3-II和Beclin-1蛋白的表达(P0.05),增强p62蛋白的表达(P0.05)。具体如下:1.400 mmol.L~(-1)高糖处理6h导致RSC96细胞损伤。用400 mmol.L~(-1)高糖处理0、3、6、9、12、24h;WB方法检测各组Cleaved Caspase-3蛋白的表达,结果显示400 mmol.L~(-1)葡萄糖处理6h时,RSC96细胞中Cleaved Caspase-3蛋白的表达显著提高(P0.01)。2.葛根素预处理可提高高糖诱导的RSC96细胞存活率,经(0.1-1)mmol.L~(-1)浓度范围的葛根素处理15min,葛根素干预浓度为0.5 mmol.L~(-1)时,RSC96细胞存活率高于对照组(P0.05),随着葛根素浓度的增加,细胞的存活率随之下降。3.与对照组相比,葛根素干预组可降低Cleaved Caspase-3蛋白表达,经高糖处理后,Cleaved Caspase-3蛋白表达显著增加(P0.01);用0.5 mmol.L~(-1)葛根素预孵育15min后,Cleaved Caspase-3蛋白的表达量明显下降(P0.05)。4.与对照组相比,400 mmol.L~(-1)高糖处理1h可诱导RSC96细胞p62蛋白的表达明显降低(P0.05);因此,后续检测自噬相关蛋白时,我们选择用400mmol.L~(-1)高糖处理1h。5.葛根素抑制高糖诱导的RSC96细胞自噬的水平,葛根素干预组相较于高糖组,LC3-II蛋白表达下降(P0.05),p62蛋白表达升高(P0.05);Beclin-1蛋白的表达在免疫细胞化学法和WB法趋势一致。免疫细胞化学结果显示Beclin-1蛋白在高糖组中呈中阳性,在葛根素干预组中呈弱阳性;WB结果表明,葛根素干预组较高糖组可显著抑制Beclin-1蛋白的表达(P0.05)。结论:葛根素预处理可显著改善高糖诱导的RSC96细胞凋亡。葛根素对高糖诱导的RSC96细胞自噬的保护作用可能与其抑制LC3-II和Beclin-1蛋白表达、提高p62蛋白表达有关。
【图文】：

图 1 不同浓度 HG 处理 24h，对 Cleaved Caspase-3 蛋白表达的影响Fig. 1 Effects of 24 h treatment with different concentrations of HG on Cleaved Caspase-3protein (#P<0.05vs control)图 2-1 400mmol.L-1HG 处理不同时间，RSC96 细胞的形态学变化（200×）

图 1 不同浓度 HG 处理 24h，对 Cleaved Caspase-3 蛋白表达的影响Fig. 1 Effects of 24 h treatment with different concentrations of HG on Cleaved Caspase-3protein (#P<0.05vs control)
【学位授予单位】：湖北民族大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

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本文编号：2593810