【摘要】：目的:以弗氏完全佐剂(complete freund's adjuvant,CFA)所诱导的佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠模型为实验基础,以临床治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的有效方剂--益肾清络活血方为实验对象,通过观察益肾清络活血方不同浓度对佐剂性关节炎(AA)大鼠模型形态学,炎性细胞因子,踝关节骨质破坏程度及踝关节滑膜、软骨组织病理损伤程度等的影响,初步探讨益肾清络活血方对AA大鼠急性期关节炎性反应的疗效及作用机制,为临床治疗提供可靠的实验依据。方法:通过给予大鼠除正常组外右后足跖趾皮内注射CFA致使大鼠成为AA。待模型复制成功后,随机分为模型组、益肾清络活血方高、中、低剂量组和雷公藤多苷片组,予各治疗组相应药物,连续给药28d。观察各组大鼠体重变化、关节炎指数、足跖肿胀度,拍摄X线观察各组大鼠踝关节病变情况;于给药结束后取血,用ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1,IL-1β)、白细胞介素10(interleukin-10)浓度;取脾脏,计算脾脏系数;取踝关节,一部分做病理学检测,一部分用Western Blot法做踝关节TNF-α蛋白检测。结果:1.各组大鼠一般情况及体重变化情况:与正常组比较,模型组大鼠精神发萎,体毛发黄少光泽,活动受限;益肾清络活血方不同剂量组与雷公藤多苷片组均较模型组在活动受限上有相应缓解。与正常组比较,其他组体重均增长缓慢;与模型组比较,各治疗组体重增长改善(P0.05);2.各组大鼠关节炎指数:与模型组比较,不同浓度益肾清络活血方组与雷公藤多苷片组AI均下降(P0.05);与雷公藤多苷片组比较,益肾清络活血方低、中剂量组AI较高(P0.05);而高剂量益肾清络活血方组AI改善相当(P0.05)。3.各组大鼠足跖肿胀度比较:与模型组比较,不同浓度益肾清络活血方组与雷公藤多苷片组足跖肿胀度均改善(P0.05);益肾清络活血方不同剂量组之间对足跖肿胀度的改善呈剂量依赖关系,益肾清络活血方高剂量组与雷公藤多苷片组足跖肿胀度改善相近(P0.05),中、低剂量组改善弱于雷公藤多苷片组(P0.05)。4.各组大鼠踝关节X线片评分:与正常组比较,模型组大鼠踝关节X线评分明显增高(P0.01);与模型组比较,高、中两个剂量益肾清络活血方组和雷公藤多苷片组对踝关节X线评分降低(P0.01),表明对AA大鼠踝关节起到保护作用。5.各组大鼠脾脏系数:与正常组相相比,模型组AA大鼠脾脏系数升高(P0.01);与模型组相比,益肾清络活血方三个剂量组与雷公藤多苷片组脾脏系数均降低(P0.01);与雷公藤多苷片组相比,益肾清络活血方低、中剂量组脾脏系数较高(P0.01),高剂量益肾清络活血方组脾脏系数均数相近,说明益肾清络活血方高剂量组与雷公藤多苷片组对降低AA大鼠脾脏系数疗效相当(P0.05)。6.各组大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-10水平:与正常组相比较,模型组大鼠血清中炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-10浓度均增高,差异有统计学意义(P0.05);与模型组比较,益肾清络活血方三个剂量组与雷公藤多苷片组炎性因子IL-1β、TNF-α浓度降低,IL-10浓度升高,差异有统计学意义(P0.05);与雷公藤多苷片组比较,益肾清络活血方不同剂量组血清促炎细胞因子IL-1β、TNF-α浓度增高,差异有统计学意义(P0.05);与雷公藤多苷片组比较,益肾清络活血方高、中剂量组血清抑炎细胞因子IL-10浓度变化无统计学意义(P0.05)。7.各组大鼠踝关节病理评分:与正常组相比,AA大鼠模型组的踝关节HE染色切片示大量炎性细胞铺满,滑膜和纤维组织增生明显,新生血管增加,大量血管翳形成,软骨侵蚀面大及骨破坏,病理评分高(P0.05);与模型组比较,高、中剂量益肾清络活血方组与雷公藤多苷片组踝节病理损伤可见明显改善(P0.05),而低剂量组对上述病理损伤减轻不明显(P0.05);高、中剂量益肾清络活血方组与雷公藤多苷片组在病理损伤改善上相当(P0.05)。8.各组大鼠踝关节滑膜TNF-α蛋白表达:与正常组相比,模型组TNF-α蛋白表达上升明显(P0.001);与模型组比较,益肾清络活血方不同浓度和雷公藤多苷片组TNF-α蛋白表达均有不同程度降低(P0.01,P0.001);与雷公藤多苷片组比较,高剂量益肾清络活血方组TNF-α蛋白表达接近(P0.05),中、低剂量益肾清络活血方组TNF-α蛋白表达则较高(P0.05)。结论:1.益肾清络活血方可使AA大鼠体重增加,降低AA大鼠关节炎指数、足跖肿胀度及脾脏系数。2.通过X线观察各组大鼠发现,高、中剂量组益肾清络活血方对骨质疏松、骨质破坏,关节间隙狭窄,关节膨大均有显著改善作用。3.益肾清络活血方可能通过降低促炎性细胞因子TNF-α、IL-1β水平,升高抑炎性细胞因子IL-10水平,从而调节破坏性与保护性细胞因子间使其达到平衡状态。4.通过光学显微镜下观察踝关节病理改变,高、中剂量组益肾清络活血方踝关节病理损伤可明显改善。5.益肾清络活血方可能通过抑制踝关节滑膜组织中TNF-α蛋白表达,改善滑膜炎症,在AA急性期减少血管翳生成和抑制骨破坏中起重要作用。
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5
【参考文献】
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