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湿润烧伤膏(MEBO)对糖尿病皮肤溃疡小鼠抗氧化作用及机制研究

发布时间:2020-03-24 00:26
【摘要】:目的:糖尿病皮肤溃疡是临床难愈性创面中比较公认的棘手问题,临床上综合治疗方法繁多,但中医中药方面治疗手段较匮乏,尤其愈合机制及抗氧化机制方面基础研究较少。本实验研究是通过观察外用烧伤中药湿润烧伤膏(MEBO)对糖尿病皮肤溃疡模型小鼠创面愈合情况、病理方面改变的影响,进一步评价MEBO对糖尿病皮肤溃疡小鼠创面愈合机制的干预作用。通过检测小鼠血清SOD、GSH-px含量,皮损处肌肉组织中Nrf2、NQO1、HO-1蛋白表达水平,探讨MEBO对糖尿病皮肤溃疡小鼠创面抗氧化作用及氧化应激的调控机制,为临床应用湿润烧伤膏治疗糖尿病皮肤溃疡提供更多的科学实验数据。材料与方法:SPF级雄性昆明种小鼠40只,实验前一天,禁食24小时,次日采用链脲佐菌素(STZ)腹腔注射法,诱导糖尿病小鼠模型,注射STZ 72小时后,随机检测血糖2次或2次以上,大于或等于16.7mmol/L确定糖尿病小鼠模型成功复制。然后给予小鼠背部去毛,用手术刀于背部将皮肤做“井”字形切口,切口长1cm左右,深度至暴露肌肉层。同时将复制成功的糖尿病小鼠模型随机分为3组,每组10只:分别为模型对照组、湿润烧伤膏组(实验组)、康复新液对照组(阳性对照组),另设健康小鼠作为空白对照组。阳性对照组和实验组分别给予康复新液及湿润烧伤膏进行外用药物换药干预创面,每日一次,连续用药7天。1周后,连续观察伤口愈合情况并做详细记录;经小鼠球后静脉丛采集全血,检测血清中SOD、GSH-PX抗氧化酶含量;HE染色法观察肌肉组织的病理变化;采集伤口部位肌肉组织,分为两块,一块儿直接冻存,用于western-blot法检测Nrf2、NQO1、HO-1表达水平;另一块固定于4%多聚甲醛溶液中,用于IH C法检测Nrf2、NQO1、HO-1表达水平。结果:1.创面愈合情况:湿润烧伤膏组,康复新液组创面愈合量率明显优于模型组对照组(p0.01),愈合速度较快。湿润烧伤膏组,康复新液组,模型对照组与空白对照组创面愈合率比较差异显著(p0.01),具有统计学意义;2.HE染色观察:造模用药1周后肌肉组织镜下病理显示4组间观察有明显差异性;3.比色法检测:湿润烧伤膏组、康复新液组糖尿病小鼠血清中SOD、GSH-px抗氧化酶含量与模型对照组相比有明显差异性(p0.01),湿润烧伤膏组、康复新液组,模型对照组SOD、GSH-px抗氧化酶含量与空白对照组相比有明显差异性(p0.01),具有统计学意义;4.WB法和IHC法检测:湿润烧伤膏组、康复新液组小鼠肌肉组织中Nrf2、NQO1、HO-1蛋白表达水平与模型对照组相比有明显差异性(p0.01),湿润烧伤膏组、康复新液组,模型对照组糖尿病皮肤溃疡小鼠肌肉组织中Nrf2、NQO1、HO-1蛋白表达水平与空白对照组上述蛋白的表达对比差异显著(p0.01),具有统计学意义;结论:1.基础实验研究的结果在一定程度上揭示了湿润烧伤膏提高了糖尿病皮肤溃疡的愈合率,与康复新液组比较有差异性,加速了创面愈合的速度。2.外用湿润烧伤膏治疗糖尿病皮肤溃疡小鼠检测血清中SOD、GSH-px含量表达明显增加,与阳性对照组及模型组比较有明显差异性;小鼠皮损肌肉利用WB法和IHC法检测湿润烧伤膏组Nrf2、NQO1、HO-1蛋白表达水平都明显增高,充分揭示了MEBO对糖尿病皮肤溃疡小鼠的抗氧化作用及Nrf2如何干预调控NQO1、HO-1蛋白的表达和调控机制。
【图文】:

阳性对照,胶原纤维,小鼠肌肉


大量团状胶原纤维增生,有部分毛细血管增生;阳性对照组成纤维细胞、胶原纤维也排列整齐,毛细血管网萎缩;实验组肌肉组织中可见成纤维细胞肥大 ,胶原纤维排列致密成形。附图一 各组小鼠肌肉组织 HE 染色镜下观察情况图 1 空白对照组(HE,200×)图 2 模型对照组(HE,200×)

实验组,胶原纤维,小鼠肌肉,毛细血管网


大量团状胶原纤维增生,有部分毛细血管增生;阳性对照组成纤维细胞、胶原纤维也排列整齐,毛细血管网萎缩;实验组肌肉组织中可见成纤维细胞肥大 ,胶原纤维排列致密成形。附图一 各组小鼠肌肉组织 HE 染色镜下观察情况图 1 空白对照组(HE,200×)图 2 模型对照组(HE,200×)
【学位授予单位】:辽宁中医药大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2019
【分类号】:R285.5

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本文编号:2597508

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