柴归方提取物抗抑郁作用机制研究

发布时间：2020-03-26 19:25

【摘要】：选题依据:抑郁症作为一种严重危害人类健康的心境障碍性疾病,不仅增添了社会负担,也损耗了医疗资源。目前临床上主要通过化学药物干预治疗,但在治疗的同时也存在诸多问题,如起效慢,服药周期长,疗效欠佳,易导致胃肠功能障碍、性功能障碍等不良反应。近年来研究发现,中药复方在治疗抑郁症方面具有明显优势,不仅能够治疗抑郁症主症,还可以改善兼症,极大的提高了临床治疗的顺应性。因此,研发新一代具有治疗抑郁症主症和改善兼症作用的抗抑郁中药新药具有十分重要的意义。柴归方是本课题组通过系统溶剂提取,药效筛选和指纹图谱分析等方法,并经过药效成分归属和原方汤剂临床观察对逍遥散进行化裁而得的新处方,基于此组方,以乙醇提取和水提醇沉相结合的工艺制备了柴归方提取物。前期药理实验结果已发现,柴归方提取物不仅具有明确的抗抑郁作用,还具有改善胃肠功能和性功能障碍的药效特点。本研究立足以上基础,通过测定慢性温和不可预知应激(CUMS)抑郁样模型大鼠血清样本中的单胺类神经递质、HPA轴相关激素、胃肠功能相关激素及性功能相关激素,探讨柴归方提取物的抗抑郁作用机制及药效特点作用机制。目的:1、基于柴归方提取物的抗抑郁作用及药效特点,探讨其对单胺类神经递质、HPA轴以及胃肠激素、性激素的影响。2、通过单胺类神经递质、HPA轴相关激素与行为学综合指标的相关分析,寻找与柴归方提取物抗抑郁药效密切相关的生物学通路,阐释其抗抑郁作用特点及药理机制。内容与方法:1、收集前期CUMS药效试验中的大鼠血清样本,采用超高效液相色谱-三重四极杆质谱方法(UHPLC-MS/MS)测定单胺类神经递质(Trp、5-HT、5-HIAA、Tyr、DA、NE),采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定HPA轴相关激素(CRH、ACTH、CORT)。2、采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定胃肠激素(GAS、MTL)、性激素(T、E2)。3、将单胺类神经递质、HPA轴相关激素与行为学综合指标(体重、糖水偏爱率、穿越格数、直立次数四个指标的主成分分析综合值)做相关性分析。结果:1、单胺类神经递质测定结果:(1)与空白对照组比较,模型组血清5-HT代谢途径上Trp、5-HT含量明显降低,5-HIAA含量明显升高(P0.05)。与模型组比较,各给药组均可以不同程度升高Trp、5-HT含量,降低5-HIAA含量,表明各药物抗抑郁作用机制具有相似性,即为升高血清5-HT代谢途径上Trp含量和降低5-HIAA含量从而增加5-HT含量发挥抗抑郁作用。相比于文拉法辛和舒肝解郁,柴归方提取物使5-HT降解成5-HIAA的量更少,表明柴归方提取物抑制单胺氧化酶(MAO)活性的作用更强;(2)与空白对照组相比,模型组血清NE代谢途径上Tyr、NE含量明显减少(P0.05)。与模型组相比,柴归方提取物高中剂量组、文拉法辛组和舒肝解郁组均可以不同程度升高Tyr、NE含量,表明柴归方提取物的抗抑郁作用机制与文拉法辛和舒肝解郁相近,即为升高血清NE代谢途径上Tyr含量从而增加NE含量发挥抗抑郁作用。DA是NE代谢途径上Tyr和NE的中间代谢物,结果发现各实验组别DA含量无显著性差异(P0.05),其一可能是CUMS模型对DA不敏感;其二可能与DA的多途径代谢有关(DA还可在神经元内代谢成DOPAC和HVA)。综上,表明柴归方提取物可能是通过调节5-HT和NE代谢途径异常从而增加血清5-HT和NE含量来发挥抗抑郁作用。2、HPA相关激素测定结果:(1)在ACTH方面:与空白对照组相比,模型组ACTH含量显著升高(P0.01)。与模型组相比,各给药组均可以显著降低ACTH的含量(P0.05,P0.01);(2)在CORT方面:与空白对照组相比,模型组CORT含量显著升高(P0.01)。与模型组相比,各给药组均可以显著降低CORT的含量(P0.01)。其中,柴归方提取物组降低ACTH、CORT的作用与舒肝解郁组相当,文拉法辛组作用最好,表明柴归方提取物对CUMS抑郁样模型大鼠HPA轴功能亢进具有较好的改善作用。3、胃肠激素、性激素测定结果:相比于空白对照组,模型组GAS、MTL,T、E2含量明显升高(P0.01),但是通过查阅相关文献发现,CUMS模型组血清中GAS、MTL、T、E2的含量一般都显著降低。因此,本研究结果需要进一步验证。4、行为学综合指标结果显示:相比于空白对照组,模型组行为学综合指标显著降低(P0.01)。相比于模型组,各给药组行为学综合指标显著升高(P0.01),表明应用行为学综合指标对抑郁样症状以及药物改善抑郁样作用判别具有可行性。抗抑郁生化指标与行为学综合指标相关分析结果显示:HPA轴激素(ACTH、CORT)、单胺类神经递质(NE、5-HIAA)与行为学综合指标相关性较高(相关性大小依次为:CORTACTHNE5-HIAA),提示当抑郁症状出现时,CORT、ACTH、NE、5-HIAA的变化比较明显,最有可能是抑郁症疾病标志物和抗抑郁药物疗效标志物;此外,NE、5-HIAA、Trp与ACTH相关性较高,NE、5-HIAA、Trp与CORT相关性较高,表明单胺类神经递质与HPA轴激素具有相互作用的联系,两者可通过神经-内分泌途径诱发、加重或者改善抑郁相关症状。结论:(1)柴归方提取物对CUMS引起的5-HT和NE代谢途径异常导致的5-HT、NE降低以及HPA轴功能亢进具有改善作用,其抗抑郁作用机制可能与调节5-HT和NE代谢途径、HPA轴功能亢进有关;(2)柴归方提取物改善胃肠功能、性功能障碍药效特点的作用机制研究数据与文献报道一致性偏低,需要重新进行研究;(3)行为学综合指标对抑郁样症状的判别以及抗抑郁药物疗效的评价有一定的参考价值,其与生化指标间的相关分析可为发现抑郁症疾病标志物和抗抑郁药物疗效标志物提供更为便捷的方法。
【图文】：

抑郁症,肠道疾病,神经生物学,和胃

图 2.1 抑郁症和胃肠道疾病之间存在相互关联的神经生物学通路与性功能疾病共病的研究现状性功能疾病共病的临床症状表现患者具有明显的躯体症状，，国外研究报道约 70%的抑郁症发躯体症状[103]。魏振杰[104]等对 230 例绝经期女性性功能进郁是影响绝经期女性性功能的重要因素。赵婉君[105]等对 1行研究显示，女性性功能障碍与抑郁程度的大小有关。王

含量比较

图 3.1 各组动物血清中 Trp 含量比较（n=10）与空白对照组比：#P<0.05，与模型组比：**P<0.01,*P<0.05图 3.2 各组动物血清中 5-HT 含量比较（n=10）
【学位授予单位】：山西大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】