黄芪注射液对肺血栓栓塞症及其溶栓后再灌注损伤的影响

发布时间：2020-03-27 04:05

【摘要】：研究背景:肺血栓栓塞症(pulmonary thromboembolism,PTE)是临床常见病,严重威胁着患者的生命健康。早期诊断、早期治疗、改善预后,是临床工作者面临的重大问题。D-二聚体是交联纤维蛋白在纤溶系统作用下产生的可溶性降解产物,为一特异性的纤溶过程标记物,对PTE的诊断有高度的敏感性和中等度特异性。乳酸脱氢酶(Lactate dbhydrogenase,LDH)存在于机体许多组织中,其同工酶LDH3主要存在于肺组织中,是肺损伤的指标之一,当PTE发生后,血液内LDH3浓度升高,活力上升,因此LDH3对PTE的诊断有一定的特异性。组织纤溶酶原激活物(Tissue plasminogen activator,t-PA)主要功能是将纤溶酶原激活成为纤溶酶,急性PTE后血管内皮受损,内源性纤溶系统激活,血浆t-PA浓度会明显升高,本实验通过建立兔急性PTE的模型,动态联合检测了 PTE后D-二聚体、LDH3及t-PA的含量,探讨能否提高PTE诊断的敏感性和特异性。目前对PTE的治疗方法应用最多的是溶栓治疗,此法可以迅速的溶解部分或者全部血栓,有效的恢复组织的再灌注能力,但是其诸多并发症也表现的越来越突出,其中溶栓后出现的缺血-再灌注损伤(Ischemia-reperfusioninjury,IRI)尤为明显,其主要是指遭受缺血一定时间的组织恢复血供后,细胞功能代谢障碍及结构破坏反而加重的病理现象,其发生的机制主要包括机体氧自由基以及脂质的过氧化反应、中性粒细胞的聚集和活化等。中医中药对PTE的治疗越来越受到关注,千百年来黄芪的功效被不断拓展发掘而被广泛应用于治疗众多疾病。黄芪属豆科,已有两千多年的用药历史,黄芪有200多种成分,其中皂甙和黄酮类化合物以及多糖被认为是主要的药理活性成分。现代研究表明黄芪具有一系列药理作用,涉及心血管、肾脏、肝脏及呼吸等系统疾病,尤其在心血管系统保护方面得到了广泛且深入的研究,其作用机制包括抗氧化应激、抑制凋亡水平、抗纤维化、调节心肌细胞离子通道活性、改善心肌代谢、拮抗炎症反应、抗病毒等。黄芪是补气药的代表,黄芪的“益气”作用与促血管新生有着密切关系,研究发现黄芪具有促进心肌梗死后血管新生、抗心肌纤维化、下调炎症因子及上调抗炎细胞因子的水平、抗心肌细胞氧化应激损伤、改善心肌能量代谢的作用,同时黄芪还具有抑制钙离子通道、抑制血小板聚集、参与免疫系统的诱导、激活和调控等作用。已有文献报道黄芪可促进脑缺血再灌注后血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)和碱性成纤维生长因子(Basic fibroblast growth factor,bFGF)的表达而对脑组织起保护作用。VEGF和bFGF都是与肝素结合的血小板源生长因子,能诱导体内和体外血管生长,它们共同维持血管内皮细胞的存活和增殖。低氧血症可刺激VEGF和bFGF表达增加,二者具有促进血管扩张、血管通透性增加、上调VEGF受体、释放蛋白溶解酶、表达抗凋亡基因等作用。已有研究证实VEGF和bFGF可促进PTE后机体血管内皮损伤的代偿性修复。那么黄芪是否可以通过促进PTE后体内VEGF、bFGF的表达而对PTE的治疗起积极作用?能否对PTE溶栓引起的缺血再灌注损伤有预防和保护作用?本研究应用多种实验方法分三个部分逐一对上述问题进行探讨。第一部分肺血栓栓塞症模型制备及诊断研究目的:观察PTE后早期血LDH3、D-二聚体和t-PA的动态变化,探讨三者对诊断PTE的特异性和敏感性,并确认PTE模型制备成功。研究方法:1动物分组:随机将16只雄兔分为两组,对照组(S组)、栓塞组(T组)各8只。2 T组采用自体血加凝血酶加纤维蛋白原的方法制备兔PTE模型。3 CT肺血管造影确认造模是否成功。4对比栓塞前后血流动力学变化(PAMP、PASP、PADP、PAWP)。5血液标本采集:分别于栓塞前、栓塞后30分钟、2小时、4小时、24小时、3天、5天采静脉血、保存备用。6 ELISA法测定血浆D-二聚体。7 ELISA法测定血浆t-PA。8全自动生化分析仪测定血清LDH3。9栓塞5天后将兔处死,剖胸取肺组织,HE染色制病理切片,观察结果。结果:1 CT肺血管造影确认造模成功2T组PAWP基本不变,PAMP、PASP、PADP在栓塞后即刻明显升高,栓塞后1小时上述指标仍维持在较高水平,与栓塞前比较,差异具有显著性(P0.05)。3 T组D-二聚体含量在栓塞后30分钟开始上升,栓塞后2小时达到峰值,与栓塞前比较,差异具有显著性(P0.05)。4T组LDH3含量于栓塞后2小时开始升高,栓塞后24小时达峰值,与栓塞前比较,差异具有显著性(P0.05)。5 T组t-PA于栓塞后30分钟开始升高,至栓塞后4小时达峰值,与栓塞前比较,差异具有显著性(P0.05)。6组织病理学观察:T组切片可见PTE表现,进一步证实造模成功。结论:1、自体血栓中加入人纤维蛋白原制备兔急性PTE的模型,可反映PTE发生后的病理生理过程,该造模方法成功,为后续PTE的研究奠定基础。2、动态联合检测D-二聚体、LDH3及t-PA能有效反应PTE病情的严重程度,提高了诊断PTE的特异性和敏感性。第二部分 黄芪注射液对肺血栓栓塞症治疗的实验研究研究目的:通过观察不同剂量黄芪注射液对PTE后机体VEGF、bFGF表达的影响,探讨其对PTE的治疗作用。研究方法:1动物分组及处理:40只雄兔随机分为对照组(S组)10只,栓塞组(T组)30只,栓塞组进行PTE模型制备。2 CT肺血管造影确认造模是否成功。3再将栓塞组分为黄芪低剂量治疗组(Tl组)、黄芪中剂量治疗组(Tm组)、黄芪高剂量治疗组(Th组)各10只,各组分别在造模后1天、2天、3天、4天注射不同剂量的黄芪注射液(2g/kg、4g/kg、6g/kg),每天各一次。S组注射等量生理盐水。4血液标本采集:分别于栓塞前、栓塞后12小时、及治疗后第1、4天采集静脉血2ml。5 ELISA法测定血清VEGF、bFGF含量。6于治疗后第4天采血完毕后将兔处死,剖胸取肺组织。7采用Western-blot方法检测肺组织VEGF及bFGF蛋白表达。8肺组织HE染色,制片、观察结果。结果:1 CT肺血管造影确认造模成功。2各栓塞组经黄芪注射液治疗后兔血清VEGF、bFGF含量均上升,以黄芪高剂量组最为明显。与Tl组比较,Tm组升高,差异具有显著性(P0.05);与Tm组比较,Th组升高,差异具有显著性(P0.05)。3各栓塞组经黄芪注射液治疗后肺组织VEGF及bFGF蛋白表达均上调,其上调趋势与黄芪治疗剂量呈正相关。与Tl组比较,Tm组上调,差异具有显著性(P0.05);与Tm组比较,Th组上调,差异具有显著性(P0.05)。4组织病理学观察:与S组比较,各栓塞组肺组织有不同程度PTE损伤表现;与Tl组比较,Tm组损伤程度减轻;与Tm组比较,Th组损伤程度减轻,可确认Th组治疗效果最明显。结论:1PTE经黄芪注射液治疗后,机体内血清及肺组织VEGF、bFGF表达上调,其上调趋势与黄芪注射液治疗剂量呈正相关。2黄芪注射液可通过促进VEGF、bFGF的表达而提高PTE后机体的代偿修复机制,对其治疗起积极作用。第三部分黄芪注射液对肺血栓栓塞症溶栓后再灌注损伤的影响研究目的:通过检测PTE溶栓后体内超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(Malondiadehyde,MDA)、髓过氧化物酶(Myeloperoxidase,MOP)及肺湿干重量比(W/D)的变化,探讨急性PTE溶栓后再灌注损伤的发生机制,并应用黄芪注射液作为干预剂研究其在肺组织缺血再灌注损伤中的保护作用。研究方法:1动物分组及处理:随机将40只雄兔分为四组:对照组(S组)、单纯栓塞组(T组)、尿激酶溶栓组(U组)、黄芪干预组(H组)各10只。S组不注入血栓,只在相应时间点注入等量生理盐水;T组行急性PTE模型制备,不进行溶栓治疗;U组注入自体血栓2小时后进行尿激酶溶栓治疗(肺缺血再灌注模型制备);H组注入血栓2小时后进行尿激酶溶栓治疗,且在溶栓治疗前即刻给予黄芪注射液进行干预(6g/kg)。2CT肺血管造影确认造模是否成功:(1)急性PTE模型;(2)肺缺血-再灌注损伤模型。3标本采集:各组分别在栓塞前、栓塞后2小时、溶栓后1小时、3小时经留置针采集静脉血2ml,4℃保存待测;采血完毕后将兔处死,剖胸取肺组织,固定,-70℃保存备用。4分别于上述各时点测定血清SOD、MDA、VEGF含量。5提取肺组织测定匀浆MPO含量、肺湿干重量比(W/D)。6 Western-blot方法检测肺组织VEGF蛋白表达。7肺组织HE染色,制片、观察结果。结果:1 CT肺血管造影证实造模成功(急性PTE模型及肺缺血-再灌注损伤模型)。2溶栓后同时段血清SOD含量比较:与T组比较,U组降低,差异具有显著性(P0.05);与U组比较,H组升高,差异具有显著性(P0.05)。3溶栓后同时段血清MDA含量比较:与T组比较,U组升高,差异具有显著性(P0.05);与U组比较,H组降低,差异具有显著性(P0.05)。4溶栓后肺组织MPO含量比较:与T组比较,U组升高,差异具有显著性(P0.05);与U组比较,H组降低,差异具有显著性(P0.05)。5溶栓后肺组织W/D值:与T组比较,U组稍升高,差异无显著性(P0.05);与U组比较,H组降低,差异具有显著性(P0.05)。6溶栓后同时段血清VEGF含量比较:与T组比较,H组升高,差异具有显著性(P0.05);与U组比较,H组升高,差异具有显著性(P0.05)。7溶栓后肺组织VEGF蛋白表达:与T组比较,H组升高,差异具有显著性(P0.05);与U组比较,H组升高,差异具有显著性(P0.05)。8组织病理学观察:与S组比较,T、U、H组有不同程度肺组织损伤表现;与T组比较,U组肺组织损伤程度加重;与U组比较,H组肺组织损伤明显减轻。结论:1急性PTE溶栓治疗后可发生缺血一再灌注损伤。2黄芪可通过促进机体VEGF的表达而减弱氧自由基介导的脂质过氧化反应,提高机体的抗氧化能力,可减轻肺缺血再灌注后微血管的损伤程度,抑制溶栓后肺组织中性粒细胞的聚集,对肺缺血-再灌注损伤具有一定的保护作用。
【图文】：

图１：两组ＣＴ肺血管造影结果逡逑

图２：肺组织病理结果ＨＥＸ４０逡逑
【学位授予单位】：武汉大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】

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本文编号：2602436