归经药替代，初步探讨温经汤温化寒凝治疗原发性痛经的药理机制

发布时间：2020-03-28 06:23

【摘要】：原发性痛经(Dysmenorrhea,PD)发病率高,临床流行病学调查统计与不孕以及妇科肿瘤关系密切。针对临床常见任脉寒凝血瘀证候,中医温经活血治疗有优势。温经汤为治疗痛经任脉寒凝血瘀证的经典方剂,前期发现解偶联蛋白4和relaxin2机能异常参与发病,本研究在此基础上,通过离体和整体动物模型,选择增强任脉局部产热分子效应或/和任脉局部抗血小板聚集效应的单体分子作为机制阳性药,选择非任脉归经的温里药或/和活血药,替代任脉归经的温里药或/和活血药,反证寒凝血瘀证“寒凝任脉”的主导病机,确认温经汤“离体实验抗子宫痉挛,在体药效为产热抗凝”的允许作用,寻找发育致病药效的靶点信号途径。实验一吴茱萸碱舒张PLCβ-IP3/DAG子宫痉挛模型目的:观察吴茱萸碱(Evo)对大鼠离体子宫平滑肌的舒张作用及其可能机制。方法:以PGF2α诱导大鼠离体子宫平滑肌收缩,生物机能实验系统观察Evo舒张离体子宫平滑肌的作用以及辣椒素受体阻断剂capsazepine,磷脂酶Cβ阻断剂U73122和钙调蛋白阻断剂W-7对吴茱萸碱作用的影响,Prism-5.01非线型可变斜率回归计算半效浓度。结果:Evo对PGF2α(EC50=9.60×10-11 mol·L-1)收缩离体子宫平滑肌舒张作用的半效浓度 9.56×10-9mol·L-1。半抑制浓度的 capsazepine(6.30×10-11 mol·L-1),U73122(2.57×10-11 mol·L-1)和 W-7(5.65×10-13 mol·L-1)预舒张离体子宫平滑肌后,Evo EC50 降低,量效曲线左移。EC50从小到大为:W-7-Evo(8.88×10-15mol·L-1)capsazepine-Evo(7.35×10-13mo1·L-1)U73122-Evo(1.95×10-12 mol·L-1)。W-7增敏 Evo 舒张子宫约 106倍,capsazepine增敏约104倍,U73122增敏约103倍。结论:Evo可通过阻断PLCβ-IP3/DAG通路上TRPV1,PLCβ和CaM舒张子宫平滑肌,根据其靶点效应比较推理,推测其结合位点为信号通路中CaM下游蛋白。实验二温经汤温化任脉治疗原发性痛经药效目的:探讨温经汤温化任脉治疗原发性痛经的药效。方法:大鼠序贯实施肩胛骨间棕色脂肪切除,d3-d76高脂饲料喂养,d21-d76灌胃己烯雌酚以复制寒凝血瘀证原发性痛经大鼠模型。以维A酸(ATRA)为温任阳性药,辣椒素(Cap)为任脉活血阳性药,d41-d76每天灌胃吴茱萸碱(Evo)、温经汤(WJD)、山茱萸替代吴茱萸温经汤(SDW)、丹参替代川芎温经汤(DDW)。d69以PGF2α诱导宫腔压力升高,d77称量子宫重量计算脏器系数,HE染色计算子宫肌层与内膜体积比;Masson染色计算子宫内膜、子宫及子宫颈胶原纤维构成比,取血分离血浆检测丙酮酸(PA)、游离脂肪酸(FFA)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC);催乳素(PRL),促卵泡素(FSH),黄体生成素(LH),雌二醇(E2),孕酮(P)含量。以对照组,模型组,WJD组和Evo组为共用组,①温化寒凝药效分析增加ATRA组、SDW组;②活血止疼药效分析加Cap组、DDW;③非任脉温里和/或活血药替代后药效降低相对值用(ATRT/SDW)和/或(Cap/DDW)表示。数据进行效能转换后,t检验比较组间差别,P0.05为有显著性意义。结果:①温化寒凝药效:与ATRA比较:WJD组,SDW组,Evo组(P0.05)子宫系数降低;WJD 组,SDW 组,Evo 组(P0.05)FFA 升高;WJD 组(P0.05),SDW 组,Evo 组(P0.01)宫内压降低降低;WJD组(P0.05),SDW组,Evo组子宫内膜构成比降低;WJD 组(P0.01),SDW 组,Evo 组(P0.01)血浆 LH 降低;WJD组(P0.05),SDW 组,Evo组血浆E2降低;WJD组(P0.05),SDW组(P0.05),Evo组血浆P升高。②活血止疼药效:与Cap组比较:WJD组,DDW组,Evo组(P0.05)子宫系数降低;WJD组,DDW组,Evo组(P0.01)FFA降低;WJD组,DDW组,Evo组(P0.01)宫内压降低降低;WJD组(P0.05),DDW组,Evo组子宫内膜构成比降低;WJD组(P0.01),DDW组,Evo组(P0.05)血浆 LH 降低;WJD 组(P0.05),DDW 组,Evo 组血浆 E2 降低;WJD 组,DDW组,Evo组血浆P升高。③温化寒凝/活血止疼:ATRT/SDW相比于Cap/DDW:FFA(P0.01),宫腔压力(P0.05),肌层胶原体积比(P0.05),宫颈胶原体积比(P0.01),血浆促卵泡素(P0.05),血浆催乳素(P0.05),血浆E2(P0.05)的ATRT/SDW高于Cap/DDW。结论:原发性痛经寒凝血瘀证的主导病机为任脉之寒,兼顾病机为寒致任脉之瘀。温经汤通过调节脂质代谢,性激素轴水平(温化寒凝),通过降低宫内压,改善内膜增生(活血止疼)治疗痛经。实验三温经汤温化任脉治疗原发性痛经药理目的:探讨温经汤治疗原发性痛经寒凝血瘀证模型大鼠的作用机制。方法:动物造模,分组给药同实验二。d77取子宫,采用Elisa测血浆relaxin2含量,免疫组化、实时定量RT-PCR和Western blot法检测子宫组织内UCP4,relaxin2的表达水平。数据分析同实验二。结果:①温化寒凝药理:与ATRT比:WJD组UCP4原位表达升高,SDW组与Evo组UCP4原位表达降低;WJD组(P0.05)与Evo组(P0.05)UCP4基因表达升高,SDW组(P0.01)UCP4基因表达降低;WJD组UCP4蛋白表达升高,SDW(P0.05)组与Evo组UCP4蛋白表达降低;WJD组,SDW组,Evo组relaxin2血浆含量升高;WJD组relaxin2原位表达升高,SDW组(P0.01)与Evo组(P0.01)relaxin2原位表达降低;WJD 组,SDW 组,Evo 组 relaxin2 基因表达升高;WJD 组(P0.01)与 Evo 组 relaxin2蛋白表达升高,SDW组(P0.01)relaxin2蛋白表达降低。②活血止疼药理:与Cap组比较:WJD组与Evo组UCP4原位表达升高,DDW组UCP4原位表达降低;WJD组(P0.05)与Evo组UCP4基因表达升高,DDW组UCP4基因表达降低;WJD组UCP4蛋白表达升高,DDW组与Evo组UCP4蛋白表达降低;WJD组,DDW组,Evo组relaxin2血浆含量升高;WJD组(P0.01)relaxin2原位表达升高,DDW组(P0.01)与Evo组(P0.01)relaxin2原位表达降低;WJD组,Evo组relaxin2基因表达升高,DDW组relaxin2基因表达降低;WJD组(P0.01)与Evo组relaxin2蛋白表达升高,DDW组relaxin2蛋白表达降低。③温化寒凝/活血止疼:ATRT/SDW相比于Cap/DDW:UCP4原位表达(P0.05),基因表达(P0.05),蛋白表达(P0.05),relaxin2血浆含量(P0.05),基因表达(P0.05),蛋白表达(P0.05)ATRT/SDW 高于 Cap/DDW。结论:原发性痛经寒凝血瘀证的主导病机为任脉之寒,兼顾病机为寒致任脉之瘀。温经汤通过提高UCP4代偿产热(温化寒凝),通过提高松弛素水平加快局部血流(活血止疼)防治痛经。
【图文】：

逦Ｌｏｇ［ＰＧＦ２ｌ，（ｍｏｌ－Ｌ邋＇）｜逦！逡逑图１－１邋ＰＧＦ２ａ诱导的离体大鼠子宫收缩（１邋ｇ邋ｌＯｍｉｎ）逡逑表１－１邋ＰＧＦ２ａ诱导的离体子宫平滑肌张力（［±ｓ，ｎ，＝８）逡逑Ｌｏｇ［ｍｏｌＬ－１］逦ＡＡＵＣ邋ｐｏｔｅｎｃｙ逡逑－１２．１８逦２５．４０±８．２８逦０．００逡逑－１１．６８逦４８．３３±邋１６．９３逦０．０３逡逑？１１．１８逦６１．４９±２２．１４逦０．０６逡逑－１０．６８逦１４１．４７±４０．９１逦０．２０逡逑－１０．１８逦２６７．１６±７０．１０逦０．４３逡逑－９．６８逦４０３．０７土９９．１３逦０．６７逡逑－９．１８逦４８５．９Ｕ１０６．８９逦０．８２逡逑－８．６８逦５４１．６７±１２０．７８逦０．９２逡逑－８．１８逦５８６．４４士邋１３４．６５邋１．００逡逑ｌ．Ｏ－ｉ邋ＥＤ５0＝９．６０＊１０＊ｎ；Ｒ２＝０．９９８７逦？逡逑ａ９５［７．６３ｘ邋ｌ0－ｎ－１．２１ｘ邋ｌ0－１０］逡逑＾邋0邋８＿邋Ｙ＝－０．０１９８＋１．０３０８／［１邋＋邋１０（－８－＾＊８２７６ｎ）］逡逑馨。．６－逦／逡逑Ｉ０＇４＇逦／逡逑０．２－邋／逡逑ｏ．ｏ－ｌ逦ｒ＾—＼逦１逦１逦１逦１逡逑－１３逦－１２逦－１１逦－１０逦－９逦－８逦－７逡逑ＰＧＦ２ｉｌ［Ｌｏｇ（ｍ0Ｉ－邋Ｌ－＇）］逡逑图１－２邋ＰＧＦ２ａ诱导大鼠离体子宫平滑肌张力变化逡逑２．２阻断剂Ｗ－７ＪＪ７３１２２和ｃａｐｓａｚｅｐｉｎｅ对离体子宫平滑肌的舒张作用（表１－２；图逡逑１－３）逡逑ＣａＭ阻断剂Ｗ－７

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【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

【参考文献】

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本文编号：2604064