益肾通络方对苯并（a）芘致雄性大鼠精子DNA损伤防护机制的研究

发布时间：2020-03-28 17:28

【摘要】：目的:复制国际公认苯并(a)芘(Ba P)致大鼠精子DNA损伤的模型,并以益肾通络方煎剂干预,观察益肾通络方对大鼠性激素、睾丸病理、精子DNA完整性及修复蛋白表达水平的影响,探讨益肾通络方保护男性精子中遗传物质的疗效机制。方法:80只雄性大鼠随机分为5组,溶剂对照组、Ba P染毒组及中药中剂量组每组20只,中药高剂量组及中药低剂量组每组10只。溶剂对照组按1ml/kg腹腔注射0.5%的二甲基亚砜,其余各组隔日均按1 ml/kg经腹腔注射工作液染毒,染毒浓度为100μg/(Kg·d),共染毒60 d。中药组均自Ba P染毒第31天开始灌胃,时间为30d。给药期间共有10只大鼠死亡。5天称量一次,观察一般情况,大鼠末次给药后溶剂对照组、Ba P染毒组及中药中剂量组每组随机取出5只与性成熟的雌鼠合笼为下一步实验做准备,其余大鼠水合氯醛(8ml/kg)腹腔注射麻醉,分别收集血清、睾丸、精子悬液,检测血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、睾酮(T)水平、睾丸组织的病理改变、精子DNA完整性、修复蛋白X线修复交叉互补蛋白1(XRCC1)及8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(OGG1)蛋白。结果:1.与溶剂对照组比较,Ba P染毒组大鼠血清FSH、LH水平均有升高(P0.01),益肾通络方煎剂各剂量组大鼠血清FSH、LH水平均低于Ba P染毒组(P0.05),其中中药高剂量显著降低(P0.01),各组之间的大鼠血清T水平比较无统计学意义(P0.05)。2.溶剂对照组睾丸切片示(图1-2):大鼠生精小管完整,排列整齐密集。生精上皮数量适中,层次分明,各级生精细胞形态正常,管腔内能够见到成熟精子,间质细胞形态无异常。Ba P染毒组睾丸切片示(图3-4):大鼠生精小管直径缩小,生精上皮层数减少,生精细胞排列疏松、紊乱,管腔内生殖细胞减少。益肾通络方煎剂各剂量组大鼠睾丸形态结构可见(图5-10):随中药量的增加,损伤程度减轻,生精小管边界变清晰,同时生精上皮厚度明显恢复,生精细胞数量增多,部分管腔内能够见到成熟精子,间质细胞没有变性。中药高剂量组损伤不显著,与溶剂对照组相比差异不大。3.与溶剂对照组相比,Ba P染毒组精子DNA损伤显著增加(P0.01);中药各剂量组大鼠精子DNA碎片指数均明显低于Ba P染毒组(P0.05);其中,高、中剂量组大鼠精子DNA碎片指数显著降低(P0.01)。4.Ba P染毒组大鼠睾丸内XRCC1蛋白、OGG1蛋白表达均明显高于溶剂对照组(P0.01);中药高剂量组大鼠XRCC1蛋白表达高于Ba P染毒组(P0.01)。与溶剂对照组组比较,Ba P染毒组睾丸细胞内OGG1蛋白的表达水平降低(P0.01);与Ba P染毒组相比,中药各剂量组细胞内,OGG1蛋白的表达水平升高,差异均有统计学意义(P0.05),其中高剂量组生精细胞OGG1蛋白表达显著增多(P0.01)。结论:益肾通络方可以防护苯并(a)芘对大鼠造成的精子DNA损伤。益肾通络方能够降低FSH、LH水平,降低生精细胞的病理损伤,上调XRCC1蛋白、OGG1蛋白的表达水平,促进机体对精子DNA损伤的修复,拮抗苯并(a)芘染毒对大鼠精子DNA的损伤。
【图文】：

蛋白,低剂量,内参,中药

图 11 XRCC1 蛋白及 GAPDH 蛋白图 12 OGG1 蛋白及 GAPDH 蛋白的分别表示溶剂对照组、BaP 染毒组、中药低剂量组、上样量均为 50 μg，用 GAPDH 作为内参。 4 各组大鼠睾丸组织 XRCC1 蛋白、OGG1 蛋白的数量（只） XRCC1 蛋白 15 0.851±0.050 10 0.726±0.052#低剂量组 10 0.767±0.049 A B C D E1H

中药,低剂量,蛋白,内参

图 12 OGG1 蛋白及 GAPDH 蛋白的表-E 分别表示溶剂对照组、BaP 染毒组、中药低剂量组、中药白上样量均为 50 μg，用 GAPDH 作为内参。表 4 各组大鼠睾丸组织 XRCC1 蛋白、OGG1 蛋白的表数量（只） XRCC1 蛋白组 15 0.851±0.050 组 10 0.726±0.052#方低剂量组 10 0.767±0.049 方中剂量组 11 0.778±0.080 方高剂量组 9 0.838±0.067*△与溶剂对照组比较#P＜0.01；与 BaP 染毒组比剂量组比较，△P＜0.05。
【学位授予单位】：河南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

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