基于石墨烯量子点-P2Y12R复合固定相的受体色谱筛选模型的构建及应用

发布时间：2020-03-29 09:51

【摘要】：从中药中筛选活性成分是创新药物的重要源泉,而活血化瘀药在血栓性疾病防治方面独具优势。血栓性疾病致死率高,血小板的聚集是引发其产生的关键环节。P2Y12受体是血小板上重要受体,具有良好的组织分布特异性及放大血小板信号的作用,已成为抗血小板聚集最重要的靶点。本论文建立P2Y12受体色谱模型,旨在筛选活血化瘀药抗血小板聚集活性成分,主要分为两部分:一、通过“氧化切割”方式制备了石墨烯量子点(GQDs),利用EDCI/NHS为偶联剂,以牛血清白蛋白(BSA)为工具蛋白,制备BSA/GQDs/Si02色谱填料。采用扫描电子显微镜和表面能谱分析等方法对固定相进行表征并对构建的BSA色谱模型进行色谱行为考察。采用直接进样法研究了 BSA与配体没食子酸、原儿茶醛、阿魏酸、香草酸、原儿茶酸和咖啡酸的相互作用。结果表明,BSA能够成功固载于GQDs/Si02色谱填料表面且具有较好的生物活性,BSA色谱模型能够稳定且特异性分离同母核结构的六种配体,并且在BSA上均存在一类结合位点。以上结果说明GQDs/Si02的色谱填料可有效固载蛋白质,并可保证蛋白质的生物活性,该方法可用于构建生物大分子药物筛选色谱模型。二、以P2Y12受体为模型蛋白,构建基于GQDs/Si02色谱填料的P2Y12受体色谱,并对P2Y12受体键合量和保留特性等进行考察。以此为药物筛选模型,对丹参、丹红注射液以及化合物丹参素异丙酯(IDHP)、丹参素冰片酯(DBZ)进行活性筛选、富集,并采用HPLC-Q-TOF-MS/MS技术进行鉴定,辅以抗血小板聚集活性验证。结果显示,P2Y12配体依诺格雷等在P2Y12受体色谱模型上有特异性保留;确定了丹参醇提液中与P2Y12受体具有相互作用的3个活性成分(二氢丹参酮Ⅰ等);水提液中的10个活性成分(丹参素等);丹红注射液中的7个活性成分(原儿茶醛等);并发现DBZ和IDHP均在P2Y12受体色谱模型上有保留且能够抑制ADP诱导的血小板的聚集。以上结果均表明基于GQDs/Si02新型色谱填料构建的P2Y12受体色谱模型可以应用于抗血小板活性成分的筛选,并为活血化瘀药活性成分高通量筛选提供了方法学支撑。
【图文】：

逡逑容纳配体分子ＡＺＤ１２８３邋（阿斯利康研发）。也有可能存在着其他的结合位点。图１所逡逑示为Ｐ２Ｙ１２Ｒ主要氨基酸与ＡＺＤ１２８３的相互作用［３５＿３６］。逡逑０９４＾＾１０９＾邋＊邋ｒ４逡逑图１邋Ｐ２Ｙ１２受体关键氨基酸与ＡＺＤ１２８３相互作用结构图逡逑附注１：邋ＡＺＤ１２８３（紫红色），关键氨基酸（绿色）逡逑Ｐ２Ｙ１２受体因其在血小板发生反应过程中具有重要地位，成为一个治疗血栓的一个逡逑非常重要的靶点蛋白。目前对于急性冠状动脉综合征（ＡＣＳ）患者的治疗，相关指南推逡逑荐以阿司匹林联同Ｐ２Ｙ１２受体拮抗剂组合用药。并且推荐患有ＡＣＳ的患者尽早用Ｐ２Ｙ１２逡逑受体抑制剂治疗［３Ｍ＇传统用药中，阿司匹林一直占有重要的一部分。越来越多研究表逡逑明，阿司匹林在治疗中，使用正常剂量或者增加用量并不能完全减少ＴＸＡ２的产生和血逡逑小板聚集过程，且同时可能会出现血栓性疾病，，这种现象被称作为阿司匹林抵抗现象｜４（）］。逡逑Ｐ２Ｙ１２受体拮抗剂是除阿司匹林外，ＡＣＳ病人和经皮冠状动脉介入（ＰＣＩ）病人的治疗逡逑基础［４１１。主要作用于Ｐ２Ｙ１２受体抑制剂有以下几种：逡逑噻吩吡啶衍生物

２．４．１基于ＧＱＤｓ固载ＢＳＡ色谱模型的表征逡逑①基于石墨烯量子点的蛋白色谱固定相的形态及能谱分析逡逑基于ＧＱＤｓ固载的ＢＳＡ固定相扫描电子显微镜结果见下图２。裸硅胶表面相对光滑，逡逑１２逡逑
【学位授予单位】：西北大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：O652.6;R284

【参考文献】

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本文编号：2605809