青藤碱对增生性瘢痕成纤维细胞生物学功能的影响

发布时间：2020-03-29 10:29

【摘要】：目的增生性瘢痕(Hyperplastic Scar,HS)是人体皮肤受到各种烧伤或手术后过度修复自身组织细胞的表现,引起局部组织增厚、色素沉着甚至脱失,严重者肢体的功能可能受到瘢痕挛缩的影响。HS给患者的身心都造成沉重的负担。已有研究显示,成纤维细胞在瘢痕形成的过程中具有重要意义。成纤维细胞增殖能力增强,凋亡能力下降,胶原分泌增加,细胞外基质沉积增多,最终导致HS的形成。青藤碱(7,8-二氢-4-羟基-3,7-二甲氧基-17-甲基吗啡-6-酮;Sinomenine,SIN),是单体生物碱,具有治疗风湿痹痛,关节肿胀等作用。此外,有报道发现,SIN能通过抑制TGF-β1、血清层黏连蛋白、纤维连接蛋白而发挥抗肾间质纤维化的作用。本研究旨在探索青藤碱对HS成纤维细胞的作用及其分子机制。方法以不同浓度SIN作用于人成纤维细胞,并按时间点收集细胞。通过MTT测定法测定细胞活力,通过流式细胞仪检测细胞周期,并通过hoechst33258法检测细胞凋亡。通过transwell实验测定法测定细胞迁移,western blot法检测相关信号分子的变化。结果1.SIN以剂量及时间依赖的方式抑制人成纤维细胞的增殖。将人成纤维细胞在25μM和50μM下连续处理12小时,24小时,36小时和48小时,并通过MTT测定法测定细胞增殖活性。24h细胞增殖抑制率分别为(13.14±5.51)%和(43.28±4.98)%;2.用相同浓度的SIN作用于成纤维细胞,以流式细胞仪对细胞周期进行检测。发现,G1期细胞增多,S期细胞相较对照组减少,证明存在G1/S期细胞阻滞现象,并且随着SIN剂量的增加,阻滞作用加强;3.行hoechst33258染色后,发现,与空白对照组相比,SIN作用后的的细胞存在凋亡促进现象,并呈剂量依赖性;4.Transwell实验发现,用SIN处理的成纤维细胞中观察到了迁移抑制;5.western blot实验发现,经过SIN处理后,人成纤维细胞的TGF-β1信号受到抑制,Cyclin D1、bcl-2及MMP2表达呈下降趋势。结论1、SIN抑制成纤维细胞的生长和迁移;2、SIN对HS成纤维细胞生长和迁移的抑制作用可能是通过调节TGF-β1通路。
【图文】：

成纤维细胞,青藤碱,活力,抑制作用

结果N 对人成纤维细胞活力的影响究中对人成纤维细胞进行胰酶消化，并根据细胞计数结果量接种于 96 孔板中。待细胞贴壁后，，分别加入 25μM、50液，与细胞共培养。在不同时间点将 96 孔板取出，加入 7℃孵育 4h 后加入 DMSO 终止反应，并充分振荡后读取 45。结果显示，25μM 及 50μMSIN 处理均对人成纤维细胞活用，并呈现剂量及时间依赖性（图 1）。

人成纤维细胞,流式细胞仪检测,周期,流式细胞仪

图 2 SIN 可引起人成纤维细胞周期 G1/S 期阻滞注：（A）以生理盐水处理人成纤维细胞并应用流式细胞仪测定周期；（B）以25μMSIN 处理人成纤维细胞并进行流式细胞仪检测；（C）以 50μMSIN 处理人成纤维细胞并进行流式细胞仪检测；（D）以不同浓度 SIN 处理人成纤维细胞后进行流式细胞仪检测，各时期细胞所占百分比。所有实验数据来自于 3 次以上独立重复平行组。*：P < 0.05。3、SIN 引起人成纤维细胞凋亡实验中发现，经过SIN处理后的人成纤维细胞发生细胞周期阻滞。因此我们对处理后的成纤维细胞进行凋亡检测。发现经过SIN处理后的细胞不仅发生细胞阻滞，也走向了凋亡。而且随着SIN浓度的加大，凋亡细胞数量增多（图3）。如图3中，蓝色斑点为皱缩的染色质，代表着已经凋亡的细胞。
【学位授予单位】：锦州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

【参考文献】