基于网络药理学构建降压抗纤方及其作用和机制研究

发布时间：2020-03-31 11:33

【摘要】：目的:结合网络药理学和传统中医理论构建治疗高血压心肌纤维化的新型中药复方一一降压抗纤方,建立降压抗纤方的质量标准并通过动物和细胞实验研究其治疗高血压心肌纤维化的作用和机制。方法:(1)检索中药数据库TCMSP中的药物、成分、靶标和疾病信息,运用网络分析软件Cytoscape从中筛选出能同时作用于高血压和心肌纤维化疾病靶标的中药,最后根据传统中医理论进一步筛选并构建降压抗纤方;(2)高效液相-质谱联用的技术绘制降压抗纤方的中药指纹图谱,并通过指纹图谱相似度评价系统对各批次的药物进行相似度分析,建立降压抗纤方的质量标准;(3)动物实验研究降压抗纤方对自发性高血压大鼠(SHR)模型心肌纤维化的作用,检测其血压、心脏功能和血清生化指标,观察心脏的组织形态学改变和胶原分布情况;(4)高效液相-质谱联用分析降压抗纤方的入血活性成分,通过分子对接找到活性成分所对应的疾病靶点并分析其所作用的信号通路,经动物实验对相关通路蛋白表达进行验证;(5)基因芯片分析降压抗纤方给药后SHR心肌组织中差异表达的基因,通过KEGG功能富集揭示降压抗纤方所调控的信号通路,经动物和细胞实验对相关的通路蛋白表达进行验证。结果:(1)确认降压抗纤方组成成分为丹参、三七、黄芪、鸡血藤和化橘红;(2)高效液相-质谱联用绘制了降压抗纤方的中药指纹图谱并建立其质量标准,确保后续实验中药物成分的稳定性;(3)动物实验中,降压抗纤方能有效降低SHR的血压并改善心脏功能和心肌纤维化,同时减轻大鼠血清中的心肌损伤指标、抑制血管炎症反应,提示降压抗纤方对高血压心肌纤维化有良好的治疗作用;(4)高效液相-质谱联用鉴定出降压抗纤方的十一种入血活性成分,经分子对接和功能富集分析提示降压抗纤方可能通过调控线粒体功能和氧化应激反应来发挥治疗高血压心肌纤维化的作用;动物实验发现,降压抗纤方能修复SHR心肌组织中损伤的线粒体结构和功能,并能减轻心血管的氧化应激反应;(5)基因芯片分析得到降压抗纤方治疗后心肌组织中的137个差异表达基因,经功能富集分析显示降压抗纤方可能通过调控TGF-beta通路来改善心肌纤维化;动物实验中,降压抗纤方能下调SHR心肌组织中TGF-beta通路相关蛋白的表达;细胞实验中,降压抗纤方含药血清能抑制心肌成纤维细胞的增殖、迁移和胶原分泌活性,同时也能下调细胞中TGF-beta通路蛋白的表达。结论:运用网络药理学和传统中医理论所构建的新型复方降压抗纤方具有抗高血压心肌纤维化的作用,其机制可能跟修复线粒体功能、减轻氧化应激反应以及抑制TGF-beta通路相关。
【图文】：

在负离子模式下可得到１０批供试品的指纹图谱（如图１），然后将其导逡逑入到《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》（２．０版本），设定Ｓ２样品为对照逡逑指纹图谱，，经过全峰匹配生成对照指纹图谱，见图２－１。逡逑１３．５００逦Ｉ逡逑１３．０００逦｜｜逡逑；＝逦Ａ逦＼邋ｓ逡逑”．５００逦｜邋＼逦＼邋ｆ逡逑＝邋４、一一＇逦／．」／广、一秦、？逦逦逦—＿邋＝＊逡逑｜邋逦逦邋；；逡逑！ｒＭ0邋？逦ｉ：＼逦／ｉ邋：逡逑Ｈ邋：：逦■邋＾逦ｊｉ邋：逦Ｓｒ逡逑ｉ：Ｅ邋广一一￣…逦ｒ．邋一逦—．一一．．一．邋ｓ？逡逑１０§ＥＥＥ＾ｋ￡￡ＥＥＥＥＥ＾邋：逡逑Ｇ１２３４Ｓ？７（？ｔ0１ｔｌ２逡逑ＭＨｌｍｔｎ］逡逑图２－１降压抗纤方指纹图谱逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－１邋Ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ邋ｏｆ邋Ｊｉａｎｇｙａ邋Ｋａｎｇｘｉａｎ邋Ｆｏｒｍｕｌａ逡逑（Ｓ１－Ｓ１０为１０批样品的抗纤方指纹图谱；Ｒ为对照指纹图谱）逡逑３，ＢＯＯ逡逑）．？００逡逑Ｓ．４００逦３逡逑３＾００逡逑３．０００逡逑２．Ｓ３Ｓ逡逑２６００．逦＊逡逑２－＊？逦｜逦，逦７逡逑Ｉ：：逡逑？邋１．８００逡逑：丨＾人逡逑Ｓ逦？逦３逦？逦Ｓ逦ｅ逦７逦８逦Ｂ逦１０逦１１逦１２逡逑■｛ｆ｜｜邋ｍｉｎ］逡逑图２－２降压抗纤方对照指纹图谱逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－２邋Ｃｏｎｔｒａｓｔ邋ｆｉｎｇｅｒｐｒｉ

３．１降压抗纤方对大鼠血压和心脏功能的影响逡逑与冒１＾组相比，８？１１１组大鼠的８８？和０８？均显著升高（均／｝＜０．００１），逡逑而反映心脏功能的ＥＦ和ＦＳ数值降低（均Ｐ＜０．００１）（图３－１，表３－１）。与ＳＨＲ逡逑组相比，降压抗纤方治疗后能有效降低ＳＢＰ和ＤＢＰ，且效果呈剂量依赖性关系，逡逑但降压效果与阳性药卡托普利相比仍有较大差距。此外，相比ＳＨＲ组，降压抗逡逑纤方各剂量组能有效增加ＥＦ和ＦＳ邋（均Ｐ＜邋０．００１），其中降压抗纤方高剂量组逡逑大鼠的ＥＦ和ＦＳ与卡托普利相比无统计学差异（Ｐ＞０．０５）。逡逑ＷＫＹ逦ＳＨＲ逦ＣＡＰ逡逑ＫＸＬ逦ＫＸＭ逦ＫＸＨ逡逑图３－１大鼠心脏二尖瓣的彩色多普勒图像逡逑Ｆｉｇｕｒｅ．邋３－１邋Ｉｍａｇｅ邋ｏｆ邋ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ邋ｃａｒｄｉｏｇｒａｍ邋ｏｎ邋ｍｉｔｒａｌ邋ｖａｌｖｅ逡逑表３－１大鼠血压和心脏功能指标（Ｘ邋±邋５’）逡
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

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本文编号：2609021