三种海洋多糖对巨噬细胞免疫调节作用的研究

发布时间：2020-04-02 07:53

【摘要】：海带(Laminaria japonica)和刺参(Stichopusjaponicus)是有重要的食用和药用价值的海洋资源,多糖是海带和刺参中一类主要的生物活性成分。本课题以从海带中提取的岩藻聚糖硫酸酯F1、F2及从刺参中提取的多糖HS为研究对象,以RAW264.7巨噬细胞为靶细胞,探索了F1、F2、HS对巨噬细胞的免疫调节机制,主要研究内容如下:1、对巨噬细胞内活性物质的影响采用MTT增殖实验研究了F1、F2、HS对细胞存活率的影响,结果表明:在166.7 μg/ml时,F1、HS、F2对巨噬细胞增殖率的作用效果为:HS(31.9%)F2(23.1%)F1(20.7%)。采用吖啶橙荧光染色法检测了F1、F2、HS对细胞中核酸代谢活性的影响,结果表明:在166.7μg/ml时,F1 HS、F2对巨噬细胞核酸荧光强度的增强效果为:HS(1.89)F1(1.85)F2(1.60)。采用溶菌酶活性检测试剂盒检测F1、F2、HS对分泌性溶菌酶活性的影响,结果表明:在166.7μg/ml时,F1、HS、F2对巨噬细胞溶菌酶活性的增强效果为:HS(272.1 U/L)F1(267.7U/L)F2(235U/L)。采用中性红法检测了F1、F2、HS对细胞吞噬活性的影响,结果表明:在166.7 μg/ml时,F1、HS、F2对巨噬细胞吞噬指数的作用效果为:HS(1.89)F1(1.85)F2(1.60)。2、对巨噬细胞分泌细胞因子的影响采用ELISA法检测了 F1、F2、HS对巨噬细胞分泌细胞因子的影响,实验结果表明:在166.7 μg/ml时,对巨噬细胞分泌IL-1β的增强效果为:HS(65.5 U/L)F1(59.1U/L)F2(56.4U/L);对巨噬细胞分泌TNF-α的增强效果为:HS(351.4 U/L)F1(334.5 U/L)F2(320.5 U/L);对巨噬细胞分泌IL-12的增强效果为:HS(21.6U/L)F1(20.5U/L)F2(18.6U/L);对巨噬细胞分泌 IL-6 的增强效果为:HS(64.7 U/L)F1(63.6U/L)F2(60.3 U/L);对巨噬细胞分泌 iNOS 的增强效果为:HS(4.0 U/L)F1(3.8 U/L)F2(3.4 U/L)。3、对巨噬细胞中细胞因子mRNA表达的影响采用RT-PCR法研究了F1、F2、HS对巨噬细胞TNF-αmRNA及IL-6mRNA表达的影响,实验结果表明:在166.7μg/ml时,对巨噬细胞TNF-αmRNA表达相对比例的增强效果为:HS(1.82)F1(1.75)F2(1.31),与ELISA检测结果一致;对巨噬细胞IL-6mRNA表达相对比例的增强效果为:HS(2.1)F1(1.8)F2(1.7),与ELISA检测结果一致。综上所述,在166.7μg/ml,F1、HS、F2均可增强巨噬细胞的免疫调节活性,且增强效果为:HSF1F2。虽然在166.7 μg/ml时,F2对巨噬细胞免疫调节活性的增强作用最小,但在500μg/ml时,F2对巨噬细胞的促增殖作用明显高于F1及HS。虽然实际血药浓度无法达到500μg/ml,但以上实验结果为将F2继续分离得到分子量更小但促增殖活性更高的多糖提供了可能。并为协同使用成本较低的几种海带岩藻聚糖硫酸酯后的免疫调节效果超过成本较高的刺参多糖提供了可能性。本课题对比研究了海带岩藻聚糖硫酸酯(F1、F2)和刺参多糖(HS)对巨噬细胞的免疫调节作用,为海带岩藻聚糖硫酸酯和刺参多糖在免疫调节方面的新应用提供了实验依据。
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285

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