青蒿琥酯调节肝癌细胞自噬机制及对细胞生长的影响

发布时间：2020-04-03 17:46

【摘要】：目的:研究青蒿素的一种衍生物青蒿琥酯的抗肝癌细胞作用,发现青蒿琥酯诱导自噬的作用机制,探究青蒿琥酯通过IRGM受体增强自噬并抑制肿瘤增殖的作用机制,为新型肿瘤化疗辅助治疗提供一个新的方向,能够有效提高药物抗肿瘤疗效,降低耐药性。方法:1.通过MTT检测法得出ART对肝癌细胞的抑制率,并用Graphpad Prism程序软件计算出IC50值。2.根据所测得的IC50值对细胞进行分组,倒置显微镜观察细胞形态,hochest染色观察细胞核变化,流式细胞仪检测ART(150uM)处理SK细胞的周期和凋亡。3.Western blot分析ART处理SK细胞的LC3、P62、PARP1蛋白,倒置荧光显微镜观察GFP-LC3荧光斑点数。4.用自噬抑制剂3-MA与ART分别处理以及联合处理细胞,Western blot分析细胞内LC3、P62、PARP1、PI3K、P-MTOR、IRGM蛋白变化,倒置荧光显微镜观察细胞内GFP-LC3斑点数。5.利用siRNA干扰技术敲低IRGM受体的表达,Western blot分析细胞内LC3、P62、PARP1、IRGM 蛋白表达。结果:1.绘制了 ART处理细胞的时间依赖性和药物浓度依赖性的抑制率曲线,根据Graphpad Prism计算的到的ART处理细胞24h的IC50值为150uM。2.分为150uM的ART药物处理组和对照组,实验组细胞伪足消失形态变圆,细胞皱缩,细胞内容物增多,细胞核固缩。ART处理组SK细胞周期阻滞在G1期和GO期,早期凋亡明显增多。3.ART 加药组的 LC3II 增多(P0.05),P62 表达下降(P0.05),细胞 GFP-LC3斑点明显增多(P0.01)。4.3-MA 处理组细胞内 LC3II、PI3K、PARP1 减少(P0.05),p-MTOR、P62 增多(P0.05),IRGM显示无统计学意义。GFP-LC3与对照组相比减少(P0.05);而3-MA与ART联合应用组表现为LC3II、P62、PARP1、PI3K、P-MTOR变化无统计学意义,IRGM增多(P0.05),并且GFP-LC3变化无统计学意义。5.SiIRGM 转染细胞 LC3Ⅱ、IRGM、PARP1 降低(P0.05),P62 升高(P0.05)。SiIRGM转染细胞与ART联合处理细胞LC3Ⅱ、IRGM、PARP1、P62蛋白变化均无统计学意义。结论:本研究发现青蒿琥酯能通过多种信号通路调节自噬从而抑制肝癌细胞的增殖,其中青蒿琥酯对PI3K和MTOR途径的调节已经较为广泛,因此本文主要研究的是青蒿琥酯通过诱导IRGM受体从而活化自噬来发挥抗肿瘤作用,为抗肿瘤机制的研究提供一个新的靶点。
【学位授予单位】：安徽理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285

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