黄刺玫果总黄酮类成分的膜分离富集及化学成分研究

发布时间：2020-04-07 01:19

【摘要】：目的:华北地区黄刺玫资源丰富,分布广泛,利用率低。本文采用膜分离技术富集黄刺玫果总黄酮,为后期制备高含量的总黄酮提取物奠定基础;建立同时测定黄刺玫果提取物中芦丁、金丝桃苷、槲皮素三种化学成分的含量测定方法,为黄刺玫果的质量控制提供依据;以α-葡萄糖苷酶抑制活性为标准对黄刺玫果75%乙醇提取物中的化学成分进行分离,为黄刺玫果的进一步开发利用奠定基础。方法:以总黄酮的保留率和膜通量为指标,采用单因素试验方法,通过改变温度、pH值、料液比确定膜分离法富集黄刺玫果中黄酮类化合物的最佳工艺条件。通过对高效液相色谱法(HPLC)中波长、流动相的考察,确定高效液相色谱同时测定黄刺玫果提取物中芦丁、槲皮素、金丝桃苷三种化学成分含量的方法,其色谱条件为:色谱柱Inertsil-ODS-SP型号,流动相乙腈-0.5%磷酸溶液,流速1.0 ml/min,检测波长360 nm,柱温37℃,进样量20μl,梯度洗脱,洗脱时间55min。并对其线性、精密度、稳定性、重复性和加样回收率进行考察。采用硅胶柱色谱法对黄刺玫果75%乙醇提取物进行初步分离,以α-葡萄糖苷酶抑制活性为标准对黄刺玫果不同极性组分进行下一步分离,通过~1H-NMR、~(13)C-NMR、DEPT、H-H COSY、HSQC、MS波谱数据进行结构鉴定。结果:超滤的最佳工艺条件是:温度45℃、料液比1:5、料液pH7.0。最佳工艺条件下,黄刺玫果提取物经超滤后,总黄酮含量达到34.00%,与原醇提物中总黄酮含量23.46%相比较有明显提升。HPLC法同时测定黄刺玫果中芦丁、槲皮素、金丝桃苷三种黄酮类成分含量的方法学考察中,精密度实验芦丁、金丝桃苷、槲皮素峰面积的RSD值分别为0.78%、0.73%、0.83%,稳定性实验芦丁、金丝桃苷、槲皮素峰面积的RSD值分别为0.79%、1.53%、1.38%,重复性实验芦丁、金丝桃苷、槲皮素峰面积的RSD值分别为0.93%、0.84%、1.02%,芦丁、金丝桃苷和槲皮素的加样回收率分别为98.10%、97.80%和97.50%,RSD值为3.20%,3.00%和2.80%,均符合实验要求;R~2均大于0.9999,线性关系良好。实验结果表明仪器精密度良好,方法重复性、准确度良好,符合实验要求。黄刺玫果实际样品中芦丁、槲皮素、金丝桃苷的含量分别为65.15μg/g、1.86μg/g、13.43μg/g。硅胶柱色谱法首先对黄刺玫果75%乙醇提取物进行梯度分离,得到E1-E10共10个组分,其中E2、E3对α-葡萄糖苷酶的抑制率分别为88.35%、45.20%,降糖活性较高,E6组分经TLC检测化学成分较为简单,三个组分均进行下一步分离,共得到5个化合物,对其中2个化合物的结构进行表征,一个确定为邻苯二甲酸二丁酯,化合物2的结构还在进一步确证中。结论:黄刺玫果总黄酮类成分的膜分离富集实验表明,超滤用于黄刺玫果提取物富集总黄酮的方法是可行的。经过方法学验证,HPLC法可用于同时测定黄刺玫果中芦丁、槲皮素和金丝桃苷的含量,该方法线性关系良好,准确性、重复性、加样回收率均符合要求。2个化合物均为首次从黄刺玫果中分离得到,其中化合物1确认为邻苯二甲酸二丁酯,化合物2的结构还在进一步确认中。其中E1、E2、E3、E9对α-葡萄糖苷酶的抑制率分别为78.76%、88.35%、45.20%、67.80%,降糖活性较高,可以推测黄刺玫果中含有具有降糖活性的化学成分。
【图文】：

图 1-1 料液温度对膜通量的影响由图 1-1 可得出，整个超滤过程中，在 3 个温度下的膜通量变化趋势都降低。在相同条件的情况下，料液温度高，膜通量也高。温度升高，分子运动加活跃，料液粘度下降，溶剂更容易透过膜。同时温度升高使溶质在溶液中的散系数增大，从而提高传质系数，，减少浓差极化和膜污染[23]。由表 1-2 可得温度为 25℃，35℃，45℃下，总黄酮的保留值分别为是 67.33%、66.63%、75.4综合考虑溶剂蒸发、膜通量、生物活性等因素，确定黄刺玫果超滤的最佳温度45℃。2.2 料液 pH 对超滤膜纯化效果的影响在压力 0.06MPa，料液比 1:5，温度为 45℃，pH=3.5/5.5/7.0 下,探讨黄玫果提取液 pH 与总黄酮保留值的关系,实验结果见表 1-4。

图 1-2 考察 pH 对膜通量的影响由图 1-2 可知，整个超滤过程中，pH=3.5 和 pH=5.5 两个 pH 下膜通量变趋势差异不大。由课题组杨莹莹等[24]研究可得，黄刺玫果原液为酸性，为避免的含量过高影响超滤效果，故主要考虑酸度影响。由表 1-4 可知，在相同条件pH=3.5，总黄酮保留率为 66.13%；pH=5.5，总黄酮保留率为 82.85%；pH=7.总黄酮保留率为 82.33%。pH=5.5 与 pH=7.0 时，总黄酮保留率差距不大，综合虑膜的清洗，膜通量及使用寿命等因素，确定黄刺玫果超滤的最佳酸碱度pH=7.0。2.3 考察料液浓度对超滤膜膜通量及分离纯化效果影响在压力 0.06MPa，pH=7.0，温度为 45℃，料液比是 1:4、1:5、1:6 下,探料液比与总黄酮保留值的关系,实验结果见表 1-5。
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R284.1

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本文编号：2617255