地龙生物活性质量控制方法的研究

发布时间：2020-04-07 04:15

【摘要】：目的建立专属性强的方法用于鉴定地龙的品种,建立地龙生物效价方法并对不同来源不同加工方法的地龙的纤溶活性进行评价。方法1.采用将12批样品进行DNA提取,用CO1通用引物进行序列扩增并双向测序拼接,其中4批进行12S rDNA引物扩增测序拼接,得到不同样品的序列及品种,从Genbank中下载相关种属的序列,采用MEGA-X软件分析处理。2.采用纤维蛋白平板的测定方法,比较不同炮制不同来源地龙样品的纤溶活性,结果1.得到了12批的15个CO1基因序列,4批的4个12s基因序列。购买的大平二号被鉴定为安德爱胜蚓;3批广地龙中有两批的样品鉴定为大腔蚓及其亚种,有一批的样品为广地龙正品;1批山地龙的样品鉴定为广地龙伪品;5批沪地龙经序列比对均为正品,3批鉴定为通俗远盲蚓,2批鉴定为威廉腔蚓。2.不同批号的凝血酶测定药材效价RSD值为1.71%,线性:点样量在12.5~400U范围内,回归方程Y=0.9824X+97.651,R~2=0.9531。回收率为86.16%,RSD为9.65%,精密度试验RSD为0.98%。3.不同产地,不同加工方法的地龙纤溶生物效价差异很大,结果0~3122U/mg;炮制方式中以冻干处理效价最高,冻干优于传统炮制方法。4.随着温度的升高,地龙的生物活性呈下降趋势,但在60℃以下较稳定。结论1.利用CO1和12S rDNA引物扩增短的地龙DNA条形码序列,可实现对中药地龙部分基原的快速准确鉴定。2、纤维蛋白平板法快速准确,具有高通量,操作简便,重现性好,可作为地龙药材的纤溶生物活性评价方法之一。3、不同来源,不同干燥方法的地龙效价差异很大。
【图文】：

图 1-4 系统进化树1，2，，3 为收集的广地龙样品，结果为：2 与广地龙条形码及数据库中其他广地龙聚为一支，为广地龙正品，图中所有广地龙最大有 23 个碱基变异位点；数据库中大腔蚓分成两大支的原因与序列的正反向有关，1-1 与 3 两序列比对 97.54%，差异不大；1 与来自海南岛的两个大腔蚓亚种聚为 1 大支，1 的两个样品与大腔蚓

不同温度提取对1号样品电泳条带影响
【学位授予单位】：山西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R284.1

【参考文献】

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3 黄文芳;石召华;陈立军;;指纹图谱技术评价不同干燥方式对地龙氨基酸组分提取物的影响[J];药物评价研究;2015年03期

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5 马梅;李薇;龚玲;卢瑞珊;;基于COI和16SrRNA基因的地龙药材及其混淆品的DNA条形码鉴定[J];中药新药与临床药理;2014年05期

6 唐秋凤;刘顺会;徐晓鹏;宋雯舒;;地龙对哮喘小鼠气道重塑的作用[J];广东药学院学报;2013年05期

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本文编号：2617435