化湿补肾法对木瓜蛋白酶诱导的大鼠膝骨关节炎模型软骨修复机制的研究

发布时间：2020-04-08 06:34

【摘要】：目的本研究为初步探讨化湿补肾法治疗膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)的机制。方法1、SD大鼠膝骨关节炎模型的建立以及鉴定木瓜蛋白酶注射法建立骨性关节炎动物模型是用于骨关节炎防治研究的常用方法之一。本研究采用木瓜蛋白酶注射法。按照随机数字表法将56只SD大鼠分出16只作为空白组(其中8只作为模型鉴定的空白组),对其余SD大鼠均进行造模,分别在第1、3、7天进行膝关节注射木瓜蛋白酶。造模完成后采用改良Mankin’s评分及HE染色光镜下观察进行模型鉴定。2、干预方法除空白组外,将余下的SD大鼠按照随机数字表法平均分为模型组、龟鹿二仙胶组、化湿定痛汤组以及化湿定痛汤+龟鹿二仙胶组,予空白组和模型组灌喂生理盐水,龟鹿二仙胶组灌喂龟鹿二仙胶,化湿定痛汤组灌喂化湿定痛汤,化湿定痛汤+龟鹿二仙胶组灌喂化湿定痛汤+龟鹿二仙胶。3、光镜下观察软骨组织形态使用苏木素-伊红(HE)染色,观察软骨组织形态并进行Mankin’s评分。4、qPCR技术检测胫骨平台软骨中p38MAPK、Ⅱ型胶原、P53含量的表达。5、Elisa检测滑膜的白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-a(Tumor necrosis factor-a,TNF-α)以及关节液的前列腺素E(Prostaglandin E,PGE)、环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)含量的表达。结果1、造模结果HE染色观察发现空白组软骨面表层切线层光滑无缺损,细胞形态正常,排列均匀,无簇集成团。而模型组软骨表层切线层破损、裂隙深达骨质辐射层,细胞成簇聚集。模型组Mankin’s评分显著高于空白组,该分数越高显示关节软骨损伤越严重,差异符合统计学意义(p0.05)。说明膝骨性关节炎造模成功。2、HE染色结果HE染色发现空白组表层关节软骨光滑平整,细胞排列均匀,无增生。模型组软骨表层切线层破损、裂隙深达骨质辐射层,细胞成簇聚集。龟鹿二仙胶组表层破坏,移行层完整,细胞排列紊乱,有增生。化湿定痛汤+龟鹿二仙胶组表层较光滑,见少量受损,移行层完整,细胞排列相对均匀。3、ELISA结果化湿定痛汤组的PGE、COX-2、IL-1β、TNF-a表达量比模型组低,p0.05,且化湿定痛汤+龟鹿二仙胶组的PGE、COX-2、IL-1β、TNF-a表达含量均比龟鹿二仙胶组低,差异符合统计学意义(p0.05)。4、PCR结果化湿定痛汤+龟鹿二仙胶组中软骨的P38、P53含量的表达低于龟鹿二仙胶组(p0.05),化湿定痛汤+龟鹿二仙胶组中Ⅱ型胶原含量的表达高于龟鹿二仙胶组(p0.05)。结论化湿定痛汤能有效抑制KOA中炎性因子的表达,减轻炎性水肿,使其减少对软骨的刺激,减少软骨的凋亡,进而促进龟鹿二仙胶对软骨的修复,延缓KOA的进程。
【学位授予单位】：福建中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5;R-332

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本文编号：2619025