金钗石斛总生物碱对高脂饮食模型小鼠胆汁酸代谢的影响与机制研究

发布时间：2020-04-08 17:56

【摘要】：目的:探讨金钗石斛总生物碱对高脂饮食模型小鼠胆汁酸代谢的影响及其机制。方法:将C57BL/6J小鼠随机分为6组,每组10只,分别为正常对照组(CD组),高脂饮食模型对照组(HFD组),金钗石斛总生物碱低、中、高剂量组(DNLA-L,DNLA-M,DNLA-H组),辛伐他汀阳性药物对照组。正常对照组始终使用普通维持饲料喂养,其它组均始终使用高脂饲料喂养。通过检测血清中低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C和总胆固醇(TC)的水平,判断小鼠体内脂质代谢情况。脂质代谢出现紊乱后,开始灌胃给药,持续18周,每天1次。DNLA混悬于0.45%CMC-Na溶液中,低、中、高剂量分别为15,30,60 mg/kg;CD组和HFD组小鼠给予等体积空白0.45%CMC-Na溶液;阳性药物对照组给予辛伐他汀20 mg/kg。末次给药12 h后,颈椎脱臼处死,收集肝脏,作HE染色和油红O染色观察病理改变,检测肝脏中甘油三脂和总胆固醇的水平;采用UPLC-MS技术对肝脏胆汁酸进行轮廓分析,并对其中48种胆汁酸进行了归属;色谱柱为Hypersil Gold C_(18)柱(2.1 mm×150 mm,1.9μm),流动相组成为含5 mmol/L乙酸铵的20%乙腈溶液和含5 mmol/L乙酸铵的80%乙腈溶液,梯度洗脱,柱温40℃。采用HESI离子化方式,喷雾电压3.5 KV,雾化气体温度300℃,离子传输管温度350℃,鞘气流速35 arb,辅助气流速10 arb。扫描模式为负离子Full Scan和ddMS Scan。RT-PCR检测胆汁酸代谢相关基因Cyp7a1、Cyp7b1、Cyp8b1、Cyp27a1、Fxr、Shp、Bsep、Mrp2、Mdr2、Fgfr4、Lrh-1、Cyp3a11、Baat、Bacs mRNA表达。结果:高脂饮食喂养18周后,小鼠体重相较于正常对照组显著增加(P0.05),血清中LDL-C和TC水平也显著升高(P0.05),提示小鼠脂质代谢出现异常,模型建立成功,开始给药。给药结束后,收集肝脏,观察组织形态学的变化。HE染色结果显示,HFD组小鼠的肝脏有弥漫性的脂肪空泡出现,同时细胞内出现大小不等的脂滴。在各个DNLA给药组,肝脏中的脂肪蓄积和肝细胞脂肪变性均有不同程度的改善,其中DNLA-L组的细胞形态最为正常,脂肪蓄积最不明显。油红O染色结果同样显示,HFD组小鼠的肝脏染色明显较CD组加深,出现了明显的脂肪堆积。在各个DNLA给药组,肝脏染色均不同程度减轻,其中DNLA-L组的脂肪含量最低。检测肝脏中TG和TC的结果表明,HFD组肝脏TG、TC水平较之CD组均明显升高,而DNLA-L组肝脏TG、TC水平与HFD组相比显著下降(P0.05),且低于阳性药物对照组(P0.05)。采用主成分分析方法比较各组肝脏胆汁酸轮廓的变化,发现CD组与HFD组两组小鼠的胆汁酸总体轮廓有明显不同,而DNLA-L组的胆汁酸轮廓更加接近CD组,并能够和HFD组明显区分。载荷图显示,CA、CDCA、LCA、DCA、TMCAs、TDCA、TUDCA、TCDCA和THDCA是对各组轮廓变化具有主要贡献的胆汁酸。采用单因素方差分析发现,与CD组相比,HFD组小鼠肝脏中胆汁酸CA、DCA、CDCA含量显著上升(P0.05),而结合胆汁酸TCDCA含量下降(P0.05)。与HFD组相比,DNLA-L组小鼠肝脏中胆汁酸CA、DCA、CDCA、LCA的浓度降低,而结合胆汁酸TDCA、THDCA、TCDCA、TMCAs和TUDCA浓度显著增加(P0.05)。此外,比较HFD组与DNLA-L组CA/CDCA值发现,DNLA能显著地抑制CA/CDCA值(P0.05)。检测胆汁酸代谢相关基因表达的结果显示,与CD组相比,HFD组肝脏基因Cyp27a1的表达水平显著升高(P0.05),而Fxr和Bacs基因表达水平显著下降(P0.05)。与CD组相比,DNLA-L组肝脏基因Cyp27a1和Shp的表达水平显著升高(P0.05),而与HFD组相比,DNLA-L组肝脏基因Fxr和Cyp3a11基因表达水平显著升高(P0.05)。结论:金钗石斛总生物碱可以调节高脂饮食模型小鼠的脂质代谢,显著改善脂质在肝脏的蓄积,其作用机制与胆汁酸代谢通路相关。主要表现为促进胆汁酸转化成亲水性高的牛磺酸结合型胆汁酸,提升胆固醇在胆汁中的溶解和排泄水平,同时降低与胆固醇吸收正相关的CA/CDCA比值。
【图文】：

遵义医科大学硕士学位论文 黄思2 结果2.1 高脂饮食模型小鼠的建立如图 1-A，高脂饮食喂养 18 周后，，与 CD 组相比，HFD 组小鼠的平均体重显著增加（P<0.05）。如图 1-B 和 1-C 所示，高脂饮食喂养 18 周后，HFD 组小鼠血清中LDL-C 和 TC 水平，均明显高于 CD 组小鼠（P<0.05）。由结果可知，使用高脂饮食喂养 18 周，小鼠脂质代谢出现异常。

HE染色观察DNLA对高脂饮食模型小鼠肝脏的影响;n=5Fi目.2EffcctofDNLAonlivcrofmiccfedwithhi目h一fatdictundcrllEstaining;n=5
【学位授予单位】：遵义医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

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