茶树油提取物对B16F10黑色素瘤细胞及其小鼠移植瘤生长的影响

发布时间：2020-04-09 07:48

【摘要】：[目的]茶树油是从茶树中提取的天然混合物,具有抗细菌、抗真菌、抗病毒、抗过敏、增强免疫力等作用。近年来报道茶树油对多种肿瘤细胞的生长具有抑制作用,但其抗黑色素瘤作用及机制尚需进一步研究。本文从体外细胞培养和体内动物实验两个方面考察茶树油提取物不同配方抗B16F10黑色素瘤的活性,筛选出较优配方并初步研究其抗黑色素瘤作用机制,研究结果可为茶树油提取物抗肿瘤作用提供依据。[方法]体外细胞实验中,茶树油提取物6个配方分别以0.0125%、0.025%、0.05%、0.1%的浓度作用于B16F10黑色素瘤细胞,MTT法检测细胞活力。以对细胞活力的抑制作用筛选出较优配方;流式细胞术分析配方5对B16F10黑色素瘤细胞周期分布和凋亡的影响;Western blot检测凋亡相关蛋白cleaved caspase-3和cleaved caspase-9表达。体内动物实验中,C57BL/6小鼠腋下皮下注射B16F10黑色素瘤细胞建立肿瘤模型,配方5或环磷酰胺瘤内注射,连续7天,PBS作为模型对照。称量小鼠体重、测量肿瘤长、短径计算肿瘤体积。试验结束时剥离肿瘤并称重;对肿瘤组织进行HE染色分析,Western blot和免疫组化分析肿瘤组织中凋亡蛋白cleaved caspase-3和/或cleaved caspase-9的表达。[结果]MTT检测结果表明不同配方茶树油在试验浓度范围内,均能有效抑制B16F10黑色素瘤细胞的生长,且有较明显的剂量-效应关系。0.025%浓度时,6个配方对细胞的抑制率约为30%～75%;配方5在0.0125%～0.05%浓度范围,细胞活力降低近60%。配方5对B16F10黑色素瘤细胞活力抑制效果最好、配方2次之、配方4优于其他3个配方。流式细胞术和Western blot结果表明,配方5可明显引起肿瘤细胞周期阻滞、促进凋亡相关蛋白cleaved caspase-3和cleaved caspase-9的表达。小鼠移植瘤实验中,配方5和环磷酰胺处理组移植瘤的体积和重量显著小于PBS对照组,配方5能够抑制移植瘤生长。HE染色表明配方5和环磷酰胺处理组肿瘤细胞生长相对稀疏、核不规则;Western blot和免疫组化分析显示其瘤组织中cleaved caspase-3和/或cleaved caspase-9表达量显著增加。[结论]茶树油提取物在体内外均能有效抑制B16F10黑色素瘤细胞及其移植瘤的生长,其作用机制与通过线粒体途径诱导凋亡有关。
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２．结果逡逑２．１不同配方茶树油提取物对Ｂ１６Ｆ１０黑色素瘤细胞生长的影响逡逑ＭＴＴ法测定不同配方茶树油提取物处理后，Ｂ１６Ｆ１０黑色素瘤细胞活力如图１－１所示，逡逑加入０．１％的ＤＭＳＯ溶剂组与加入完全培养液的正常对照０Ｄ值没有显著性差异，表明用逡逑于药物稀释浓度的ＤＭＳＯ对Ｂ１６Ｆ１０黑色素瘤细胞无明显毒性。各配方对细胞的毒性呈剂逡逑

逡逑由图１－１可知，配方２、５在０．０１２５％？０．０５％浓度时均优于剩余配方。为了筛选出最逡逑佳配方，将配方２、５在０．０２５％和０．０５％浓度下的Ｂ１６Ｆ１０黑色素瘤细胞的相对活力做差异逡逑显著性分析。结果如表１－１所示，在表中浓度下都有不同程度的显著差异，，配方５几乎在逡逑两个浓度下与其余配方都有显著性差异。配方２在０．０２５％、０．０５％浓度下与配方４和５都逡逑有显著性差异，而配方５在０．０２５％和０．０５％浓度下与配方１？３都有显著差异，在０．０１２５％逡逑浓度时与配方６有极显著差异。茶树油提取物不同配方对Ｂ１６Ｆ１０黑色素瘤细胞活力的抑逡逑制顺序为：配方５＞配方２＞配方４处＞配方６＞配方１＞配方３。因此，后续实验采用配逡逑方５进行。逡逑２．２茶树油提取物对Ｂ１６Ｆ１０黑色素瘤细胞周期的影响逡逑Ｂ１６Ｆ１０黑色素瘤细胞经过０、０．００６２５％、０．０１２５％、０．０２５％、０．０５％茶树油提取物孵逡逑育２４ｈ后，用流式细胞仪检测Ｂ１６Ｆ１０黑色素瘤细胞经茶树油提取物作用后的细胞周期状逡逑况，结果如图１－２所示。逡逑由图１－２中数据可知，茶树油提取物对瘤细胞的作用随着浓度的变化使其被阻滞在不逡逑同的细胞周期
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

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