黑木耳黑色素对酒精肝损伤的体内、体外药效学研究

发布时间：2020-04-11 09:57

【摘要】：肝脏是酒精代谢的主要器官,酒精代谢过程中会产生大量有害物质,造成肝脏损伤。从食药用菌中寻找天然活性物质是预防和治疗酒精肝损伤的一个研究热点。黑木耳是我国传统的食药用菌,具有丰富的营养价值和多种生物活性。黑木耳中含有大量的黑色素,然而关于黑木耳黑色素的体内生物活性研究却鲜有报道,这在很大程度上限制了这种天然色素的应用。为促进黑木耳黑色素的开发利用,本文对黑木耳黑色素进行了鉴定并探究了其纤维素酶-超声波协同提取工艺,通过体外细胞实验和体内动物实验,探究了黑木耳黑色素对酒精肝损伤的干预作用及初步药理作用机制。本文具体研究内容及结果如下:(1)通过紫外-可见光谱、红外光谱、元素分析、凝胶渗透色谱、以及核磁共振氢谱对黑木耳黑色素进行结构表征,在此基础上,探究了黑木耳黑色素的纤维素酶-超声波协同提取工艺。结果表明,黑木耳黑色素属于真黑色素,平均分子量为48.99 kDa,最大吸收波长在215 nm,分子中具有吲哚结构,符合黑色素的典型特征。纤维素酶-超声波协同提取法可显著提高黑木耳黑色素提取率,在最优条件下,黑色素提取得率可达到10.48%,相比传统的浸提法提取率提高了46.98%。(2)在细胞水平上探究黑木耳黑色素对酒精肝损伤的干预作用,采用MTT法检测细胞活力,并通过测定细胞内活性氧(ROS)水平和GSH(还原型谷胱甘肽)/GSSG(氧化型谷胱甘肽)比值分析黑木耳黑色素对酒精引起的L02肝细胞氧化应激的影响。实验结果表明,黑木耳黑色素能显著提高酒精预处理的L02肝细胞的存活率(p0.01),还能够改善细胞形态,降低细胞内ROS水平(p0.01),提高GSH/GSSG比值(p0.01)。(3)通过动物实验进一步对黑木耳黑色素干预酒精肝损伤的作用进行研究。采用灌胃的方式给予小鼠酒精,建立肝损伤模型,通过血清与肝功能指标的检测、病理切片的观察、以及测定相关抗氧化酶mRNA的表达来评价黑木耳黑色素对酒精肝损伤的治疗和预防效果。实验结果表明黑木耳黑色素对小鼠酒精肝损伤具有良好的预防和治疗作用,能够显著降低小鼠ALT、AST和MDA水平,提高ADH、SOD、CAT水平(p0.01);黑木耳黑色素还能够明显改善酒精引起的小鼠肝组织的形态学改变;荧光定量PCR实验结果表明,黑木耳黑色素能够上调Nrf2及其下游的抗氧化酶mRNA的表达(p0.01)。本文明确了黑木耳黑色素对小鼠酒精肝损伤的治疗与预防作用及其初步药理作用机制,丰富了黑木耳黑色素的药理药效,为其相关产品的开发提供了新思路,同时本研究还为黑木耳黑色素的高效提取提供了新方法。
【图文】：

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研究技术路线

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在最大波长下检测吸光度，以氢氧化钠溶液为空白，绘制了黑木耳黑色素含量标准曲线（图2-1）。依据标准曲线计算提取液中黑色素含量，，并根据公式 2-1 计算黑木耳黑色素提取率。(%) 100%黑木耳子实体粉末质量提取液中黑色素质量提取率（2-1）图 2-1 黑色素标准曲线Fig.2-1 Standard curve of melanin（2）酶解单因素试验在固定超声条件（超声温度 30°C、超声时间 30 min、超声功率 250 W、料液比 1:30、NaOH 浓度 1.25 mol/L）的前提下，以黑色素提取率为指标，分别考察了酶底比（0.8%、1.0%、1.2%、1.4%、1.6%和 1.8%）、酶解温度（30、35、40、45、50 和 55°C）、酶解 pH（3.5、4.0、4.5、5.0、5.5 和 6.0）和酶解时间（20、40、60、80、100 和 120 min）对黑木耳黑色素提取率的影响，每组实验重复 3次。（3）酶解正交优化对上述酶底比、酶解温度、酶解 pH 以及酶解时间 4 个单因素进行筛选，选出对黑色素提取率影响较大的 3 个水平进行正交实验，正交实验设计见表 2-2。
【学位授予单位】：福建农林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

【参考文献】