胡桃楸水提取物在体内的代谢与分布及没食子和丁香酸的药代动力学研究

发布时间：2020-04-13 00:10

【摘要】：目的:胡桃楸(Juglans mandshurica Maxim.)又名山核桃、核桃楸,为胡桃科胡桃属植物。在民间,采用胡桃楸根、枝和叶水煎液治疗肿瘤的方法广为流传,并且效果显著;在临床中,将胡桃楸与其他中药材共同制成复方制剂,用于治疗肿瘤。正是由于胡桃楸抗肿瘤效果明显、应用广泛,使胡桃楸获得更加广泛的关注。随着研究的不断深入,被分离、鉴定的胡桃楸提取物成分已经过百;其中部分化合物在体外研究中已经被证实具有抑制肿瘤细胞的作用。但是,除沈阳药科大学孙志等人对胡桃楸乙醇提取物中8个单体成分的药代动力学参数进行研究之外,未见胡桃楸体内过程的相关报道。因此,本论文对胡桃楸水提取体内过程及药代动力学进行研究,为胡桃楸抗肿瘤有效成分的研究奠定了坚实的基础,对开发基于胡桃楸的抗肿瘤中药具有重要意义。材料与方法:1实验材料1.1胡桃楸茎枝采摘于辽宁省大连市普兰店莲山镇(2016年4月),并由辽宁中医药大学翟延君教授鉴定为胡桃科植物胡桃楸(Juglans mandshurica Maxim.),凭证标本编号为ZHI20160406,保存于辽宁中医药大学中药鉴定研究室。1.2 SPF级ICR小鼠和SD大鼠,均购于辽宁长生生物技术有限公司,实验动物合格证号为SCXK(辽)2015-0003。2实验方法2.1采用回流法制备胡桃楸水提取物,应用UHPLC-Q-TOF-MS/MS分析方法对胡桃楸水提取物中的化学成分进行系统研究。2.2采用最大给药量法研究胡桃楸水提取物的急性毒性作用。2.3采用蛋白沉淀法处理生物样品(血浆、心、肝、脾、肺、肾、胆汁、尿液和粪便);采用UHPLC-Q-TOF-MS/MS方法分析、鉴定样品中胡桃楸水提取物的原型化合物和代谢物,研究胡桃楸水提取物在体内的分布与代谢。2.4采用HPLC分析方法,研究胡桃楸水提取物中没食子酸和丁香酸在大鼠血浆中的药代动力学参数。结果:1.按照规范方法制备胡桃楸水提取物,得率为12.5%,生药量为8 g/g。其中共有105个化合物被鉴定,分别为54个鞣质、30个有机酸、8个萘衍生物、8个多糖、4个黄酮和1个二芳基庚烷类衍生物。2.灌胃给予ICR小鼠胡桃楸水提取物(9.6 g/m L,以生药计),灌胃量为0.5m L/20g。灌胃后14天内小鼠的一般生理状况未见异常,心、肝、脾、肺和肾未发生肉眼可见病变,最大耐受量为226 g/kg(以生药计)。3.采用甲醇作为蛋白沉淀剂,加入p H 7.8-8.0的磷酸盐缓冲液,涡旋后离心取上清液,氮气吹干,残渣复溶后,离心,取上清液供HPLC分析。如果采用上述方法处理生物样品,胡桃楸水提取物中大多数成分的提取回收率大于75%。4.血浆样品中共鉴定出33个化合物,包括12个原型化合物和21个代谢物。其中,按结构类型分类,原型化合物可分为4类,包括鞣质、有机酸、萘衍生物和二芳基庚烷类衍生物;代谢物可分为4类,包括葡萄糖醛酸化物、硫酸酯化物、葡萄糖醛酸化硫酸酯化物和异构化反应产物。胆汁样品中共鉴定出28个化合物,其中,7个原型化合物,包括鞣质、有机酸和萘衍生物;21个代谢物,包括葡萄糖醛酸化物、硫酸酯化物、葡萄糖醛酸化硫酸酯化物和异构化反应产物。尿液样品中共鉴定出33个化合物,其中,20个原型化合物,包括鞣质、有机酸、黄酮、多糖和萘衍生物;13个代谢物,包括葡萄糖醛酸化物、硫酸酯化物、葡萄糖醛酸化硫酸酯化物和异构化反应产物。粪便样品中鉴定出71个化合物,其中,67个原型化合物,包括鞣质、有机酸、黄酮、多糖、二芳基庚烷类衍生物和萘衍生物;4个代谢物,包括硫酸酯化物和异构化反应产物。肝样品中鉴定出苹果酸和柠檬酸;脾和肺样品中鉴定出柠檬酸;心和肾样品中暂未见药物分布。5.没食子酸在0.04-5μg/m L范围内线性良好,最小检测限(LOQ)为0.006μg/m L,最小定量限(LOD)为0.04μg/m L;日内和日间精密度(RSD)分别为1.8-11.0%和3.5-9.4%,准确度(RE)分别为-0.7-1.3%和-0.5-2.1%;血浆提取回收率为81.2-94.4%;药代动力学参数为Cmax=0.64±0.05μg/m L,Tmax=61.80±8.03min,T1/2=184.21±12.73 min,AUC0-t=96.37±10.33μg?min/m L,AUC0-∞=121.59±8.87μg?min/m L。丁香酸在0.04-5μg/m L范围内线性良好,最小检测限(LOQ)为0.008μg/m L,最小定量限(LOD)为0.04μg/m L;日内和日间精密度(RSD)分别为4.0-6.9%和2.1-8.8%,准确度(RE)分别为-1.2-4.9%和-4.8-0.8%;血浆提取回收率为84.9-93.6%;药代动力学参数为Cmax=0.43±0.04μg/m L,Tmax=30.67±0.92min,T1/2=99.63±5.96min,AUC0-t=40.33±2.42μg?min/m L,AUC0-∞=47.02±3.29μg?min/m L。结论:1.胡桃楸水提取物中的化合物以鞣质和有机酸为主,含有少量的黄酮、萘衍生物和二芳基庚烷类衍生物。2.胡桃楸水提取物无明显急性毒性作用。3.血浆样品中代谢物多于原型化合物,原型化合物以鞣质和有机酸为主,被代谢的化合物以萘衍生物、黄酮和二芳基庚烷类衍生物为主。代谢类型分为结合代谢和异构化反应产物,以结合代谢为主。胆汁样品中原型化合物明显少于代谢物,原型化合物以鞣质和有机酸为主,被代谢的化合物以黄酮和萘衍生物为主,代谢类型以结合代谢为主。尿液样品中含原型化合物多于代谢物,原型化合物中含有大量的有机酸。代谢物以有机酸和萘衍生物为主,代谢类型以结合代谢为主。粪便样品中含有大量原型化合物,仅有4个代谢物,分别为硫酸酯化和异构化反应产物。组织中分布了2个有机酸,分别为苹果酸和柠檬酸,其中心和肾样品中未鉴定出原型物质和代谢物。4.鞣质、有机酸、萘衍生物、黄酮和二芳基庚烷类衍生物可以被吸收进入血液,萘衍生物和黄酮类化合物主要从胆汁排泄,鞣质和有机酸主要从肾排泄,二芳基庚烷类衍生物从胆汁和肾排泄。5.应用于胡桃楸水提取物中没食子酸和丁香酸在大鼠血浆内药代动力学研究的HPLC分析方法,专属性和灵敏度均符合生物样品分析要求。该研究有助于阐明药物作用机制和指导临床用药。
【图文】：

苹果酸,二级质谱

-3苹果酸的二级质谱图

二级质谱,葡萄糖,没食子酸,分子离子峰

m/z 169.0140 为没食子酸的分子离子峰，因此，结构被鉴定为 1,2,6-三没食子酰基葡萄糖。如图 1-2-7、图1-2-8 所示[M-H]-, 635.0852图 1-2-7 1,2,6-三没食子酰基葡萄糖的二级质谱
【学位授予单位】：辽宁中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【相似文献】