补骨脂—肉豆蔻药对的血清指纹图谱和指标成分药物动力学研究

发布时间：2020-04-13 01:32

【摘要】：目的补骨脂-肉豆蔻药对为中医临床常用药对,两药合用具有温肾暖脾,涩肠止泻之功效。本课题以补骨脂-肉豆蔻药对为研究对象,建立补骨脂-肉豆蔻药对含药血清指纹图谱,探讨药效物质基础;采用超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)技术快速分析补骨脂-肉豆蔻药对配伍对移行成分的影响;采用UPLC-MS/MS技术探究口服补骨脂-肉豆蔻药对配伍前后对指标成分药物动力学过程的影响。方法1.对20只SD大鼠分别灌胃10个不同批次的补骨脂-肉豆蔻药对提取物,采用UPLC法比较体外供试品、含药血清和空白血清指纹图谱,分析其入血成分。2.建立超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)技术快速分析补骨脂-肉豆蔻药对提取物在大鼠体内移行成分,并结合Peakview软件进行分析。3.将36只SD大鼠随机分为三组(A组、B组、C组)并分别灌胃补骨脂提取液、补骨脂-肉豆蔻药对提取液、肉豆蔻提取液,于不同时间点采集血浆样品。采用UPLC-MS/MS多反应监测(MRM)定量分析,以氯霉素为内标物在正离子模式下建立血浆中补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚及氢二异丁香酚药物浓度的测定方法,研究口服补骨脂-肉豆蔻药对配伍前后指标成分的药物动力学过程。结果1.建立10个不同批次的补骨脂-肉豆蔻药对的UPLC血清指纹图谱(相似度0.90),标出13个共有峰(相似度均在0.90以上),其中10个峰来源于体外供试品中原型成分,3个峰为代谢产物。2.补骨脂-肉豆蔻药对配伍前后移行成分结果如下:与体外补骨脂提取物相比,有17个原型成分入血;与体外补骨脂-肉豆蔻药对提取物相比,有28个原型成分入血;与肉豆蔻药材提取物相比,有6个原型成分入血。3.采用UPLC-MS/MS多反应监测(MRM)定量分析,血浆样品中补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚和去氢二异丁香酚分别在39.25~0.098125μg/m L、33.75~0.084375μg/m L、18.75~0.046875μg/m L、2.2~0.11μg/m L范围内线性关系良好,精密度、稳定性的实验结果表明,该类成分的血药浓度测定方法稳定可靠。四种指标成分吸收迅速,补骨脂素和异补骨脂素具有双峰现象,配伍后Tmax明显缩短,Cmax和AUC0-t均有不同程度的增加。结论采用血清药物化学方法,建立补骨脂-肉豆蔻药对血清指纹图谱,反映补骨脂-肉豆蔻药对口服给药吸收入血情况,并采用UPLC-Q-TOF/MS技术对补骨脂-肉豆蔻药对配伍前后血清移行成分进行定性分析,为其体内药效物质研究奠定基础。采用UPLC-MS/MS技术考察配伍对补骨脂-肉豆蔻药对指标成分动力学参数的影响,根据DAS 2.0计算所得药物动力学参数在配伍前后均有不同程度的差异,说明补骨脂和肉豆蔻配伍能影响指标成分在体内的药动学过程,使分布更广泛,代谢消除更快。
【图文】：

E图 1-1 不同时间点补骨脂-肉豆蔻药对血清的 UPLC 图谱A：空白血清样品；B：1h 血清样品；C：2h 血清样品；D：3h 血清样品；E：4h 清样品ig.1-1 The different time points of Drug-couple Psoralea corylifoLia L-Myristica fragrants Hoon serum Chromatogram of UPLC：blank serum sample；B：serum sample at 1 hour；C：serum sample at 2 hour；D：serum samat 3 hour；E：serum sample at 4 hour.5 含药血清样品处理方法的筛选[10].5.1 10%三氯乙酸沉淀法取含药血清 400 μL 至 5 mL EP 管中，加入 800 μL 10%三氯乙酸，涡旋 1 mi

实验一 补骨脂-肉豆蔻药对含药血清指纹图谱研究溶，移置 5 mL EP 管中，涡旋混匀，再次 12 000 r/min 条件下离心 10 min，，上清液为含药血清供试品。将处理好的空白血清样品及给药后血清样品各 200进行 UPLC 分析。2.7 血清指纹图谱方法学的考察2.7.1 精密度考察取含药血清样品 S12 μL，按“2.1”项下色谱条件，连续进样 6 次，以考仪器精密度，记录得到的图谱图，经“中药特色指纹图谱相似度评价软件（2004版”计算，6 张图谱的相似度均 ≥ 0.934，见表 1-2，表明整个检测系统的精密良好。
【学位授予单位】：安徽中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R284.1;R285.5

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本文编号：2625425