鱼腥草挥发油抗乳腺癌药效学及其胶束的制备研究

发布时间：2020-04-14 15:29

【摘要】：鱼腥草挥发油(Houttuynia cordata Thunb volatile oil,HCO)是鱼腥草的主要药效组分。预实验得出HCO具有显著抑制MCF-7乳腺癌细胞增殖的作用,在此基础上,本课题进一步研究HCO对MCF-7细胞的体外药效学、HCO对MCF-7细胞Bcl-2蛋白表达量的影响、体内药效学,且对HCO胶束的制备与评价及其大鼠体内药代动力学进行研究。为HCO作为抗乳腺癌新药提供科学依据。1.HCO诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡初步研究MTT法测定HCO对MCF-7细胞的抑制增殖率。作用24 h后,0.40μL/mL的HCO抑制率达70.78%,IC_(50)值为0.284μL/mL。作用48 h后,0.40μL/mL的HCO抑制率达88.30%,IC_(50)为0.236μL/mL。作用72 h后,0.40μL/mL的HCO抑制率达95.21%,IC_(50)为0.217μL/mL。结果表明:HCO具有显著抑制MCF-7细胞增殖的作用。PI单染检测给药后对MCF-7细胞细胞周期的影响。给药48 h后,与正常细胞相比,S期细胞数目增多。随着HCO浓度的增加,S期细胞数目呈现增加趋势。结果表明:HCO将细胞阻滞在S期。FITC-Annerxin V/PI双染法检测细胞给药后细胞的凋亡状况。给药48 h后,在0.25μL/mL以前,随着HCO浓度的增加,早期凋亡率和总凋亡率增加。坏死率在0.3μL/mL时呈现剧增的趋势。结果表明:HCO具有促使MCF-7细胞凋亡的作用。普通倒置显微镜下观察不同浓度的HCO对MCF-7细胞的凋亡状况。给药48 h后,普通倒置显微镜下观察细胞明显皱缩、变圆、核仁破碎,细胞之间的连接中断,细胞脱落。随着药物浓度加大,细胞增殖减少甚至死亡。结果表明:HCO具有抑制MCF-7细胞增殖促使凋亡的作用。2.HCO对MCF-7细胞Bcl-2蛋白表达量的影响Western Blot实验测定HCO对MCF-7细胞Bcl-2蛋白表达量的影响。给药24 h后,收集细胞总蛋白,以GAPDH为内参蛋白,MCF-7细胞中Bcl-2蛋白表达量减少。结果表明:HCO导致MCF-7细胞中Bcl-2蛋白表达量下调。3.HCO体内抗乳腺癌药效学研究建立荷乳腺癌小鼠动物模型,研究HCO体内药效。将荷瘤小鼠模型随机分组给药,设置组别分别为生理盐水组、顺铂组(1 mg/kg)、HCO组。HCO给药剂量分别设定为80 mg/kg、160 mg/kg、240 mg/kg。给药方式为腹腔注射。HCO给药剂量为240 mg/kg时,抑瘤率最高为62.16%,顺铂(1 mg/kg)抑瘤率为55.40%。80 mg/kg、160 mg/kg的HCO抑瘤率分别为27.03%、39.19%。顺铂组的小鼠体重下降1 g左右,HCO组的小鼠体重基本不变。HE染色得出,随着HCO浓度的增加,肿瘤组织坏死面积增加,呈现出量效关系。对其它脏器没有较大的副作用。试验结果表明:HCO对接种MCF-7细胞荷瘤小鼠的肿瘤生长具有一定的抑制作用。4.HCO胶束的制备与评价采用薄膜分散法制备HCO胶束。单因素考察制备处方和工艺因素,minitab17软件进行三因素三水平的Box-Behnken设计响应面法优化胶束的制备方法。最优条件制备的HCO胶束进行形态特征观察、释放度试验、影响因素试验、稳定性考察。HCO/泊洛沙姆407为1:3、有机溶剂的体积为5 mL、水化体积为5.4 mL时,HCO胶束的包封率可达到87.26%,RSD值为1.79%,粒径大小为35.20 nm,PDI为0.158。在透射电镜下,HCO胶束呈球状,无粘连。在相同的时间段内,HCO胶束累积释放量低于直接溶解法制备的胶束。在室温条件下,HCO胶束放置90 d较稳定。试验结果表明:最优条件制备的HCO胶束具有缓慢释放的作用,HCO胶束的最优储存条件为室温、避光、密封保存。5.HCO与HCO胶束的体内药物动力学研究HCO与HCO胶束灌胃给药,在特定的时间段内眼眶取血,DAS 2.0软件求出各个参数。HCO胶束的最大血药浓度为4.85μg/mL,HCO原料药的最大血药浓度为5.00μg/mL。HCO胶束达峰时间为4 h,HCO原料药达峰时间为2 h。HCO胶束的半衰期比HCO原料药的半衰期延长。试验结果表明:HCO胶束提高了药物生物利用度。综上研究结果,HCO具有抑制MCF-7乳腺癌细胞增殖的作用;HCO导致MCF-7细胞凋亡可能与Bcl-2蛋白表达量下调有关;HCO对荷MCF-7乳腺癌小鼠的肿瘤生长具有抑制作用;制备的HCO胶束具有较高的包封率,增加了其溶解性,提高了药物生物利用度。本课题为HCO抗乳腺癌进一步研究提供有效的参考。
【图文】：

抑制率,顺铂

13图 2.1 HCO 对 MCF-7 细胞增殖抑制率Fig.2.1 Proliferation inhibition rate of HCO on MCF-7 cells(a) 24 h 增殖抑制率、(b) 48 h 增殖抑制率、(c) 72 h 增殖抑制率与顺铂组比较*P<0.05，**P<0.01

细胞周期分布,MCF-7细胞,抑制率,给药时间

第二章 HCO 诱导 MCF-7 乳腺癌细胞凋亡初步研究由上述实验结果看出，给药 24 h、48 h、72 h 的抑制率最高分别达 70.78 %、88.30 %、95.21 %。24 h 时的 IC50值为 0.284 μL/mL；48 h 时的 IC50值为 0.236μL/mL；72 h 时的 IC50值为 0.217 μL/mL。给药浓度相同，随着给药时间的延长，抑制率相应增加。给药时间相同，随 HCO 浓度的增加，，抑制率相应增加。24 h时，0.20 μL/mL HCO 对细胞的抑制率与 10 μg/mL 的顺铂相当（P>0.05）；48 h、72 h 时，0.35 μL/mL HCO 对细胞的抑制率与 10 μg/mL 的顺铂相当（P>0.05）。3.2 PI 单染检测细胞周期流式细胞术检测得到的 HCO 诱导 MCF-7 细胞周期分布情况，结果如下：
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R283.6

【相似文献】