垫状卷柏提取物的制备工艺及物质基础研究

发布时间：2020-04-15 02:15

【摘要】：垫状卷柏是民间传统用药,现代药理学研究证明垫状卷柏具有抗肿瘤、降血糖、抗菌抗病毒等多种药理活性,15版《药典》收载卷柏或垫状卷柏为药用品种。双黄酮类化合物被认为是卷柏属植物的主要药效成分,其中穗花杉双黄酮为垫状卷柏提取物中含量较高的双黄酮,具有降血糖、抗氧化、抗炎等多种生物学活性作用。本课题将以穗花杉双黄酮含量为考察指标,对提取方法、富集工艺进行优化,并对富集后的垫状卷柏提取物进行定性分析及活性评价,同时构建卷柏药材指纹图谱,主要内容如下:(1)在单因素实验基础上以乙醇浓度、加醇倍量、提取时间、提取次数设计响应面,优化醇提工艺。得到最优提取条件:乙醇浓度71%、提取时间60 min、提取次数3次、加醇倍量12倍,在此条件下,穗花杉双黄酮提出量为17.28 mg/g。以穗花杉双黄酮含量为主要指标,采用大孔树脂和二次沉淀两种简单的方法富集垫状卷柏粗提物,并优化工艺参数。大孔树脂最优参数:提取物浓度100 mg/mL,上样流速1.0 mL/min,80%乙醇洗脱,洗脱流速1.0 mL/min,洗脱溶剂用量4倍柱体积,在此条件下提取物中穗花杉双黄酮含量由原来的13.79%提高至52.46%;二次沉淀最优参数:乙醇浓度30%,水沉温度5℃,搅拌速度400 rpm,加水速度3 mL/min,该条件下提取物中穗花杉双黄酮含量提高至47.92%。大孔树脂富集工艺更适用于垫状卷柏提取物中穗花杉双黄酮的富集。(2)利用HPLC-MS~n技术结合化合物碎片信息及文献资料,对富集后垫状卷柏提取物进行定性鉴别,共鉴定27个化合物,其中13个黄酮类成分、10个炔酚类成分以及4个其他类型的化合物,为有效地阐明垫状卷柏提取物的药效物质基础提供参考价值。(3)对富集后的垫状卷柏提取物进行体外降糖活性和抗氧化活性试验。结果表明垫状卷柏提取物对α-葡萄糖苷酶具有较好的抑制作用,其IC50值分别为0.1978 mg/mL(阿卡波糖的IC50值为2.6996mg/mL)。DPPH实验表明垫状卷柏提取物是一种慢速抗氧化剂,其IC50为184.8μg/mL(VC的IC50值为12.84μg/mL)。(4)对14批卷柏属药材进行含量测定并建立卷柏药材指纹图谱的共有模式,指定7个共有峰,其中卷柏药材相似度均大于0.8,聚类分析和主成分分析均将样品分为4类,其中2号峰(穗花杉双黄酮)是卷柏药材分类归属的关键成分,从产地分类归属看指纹图谱技术结合化学计量学可为卷柏药材的整体质量评价提供科学依据。本课题对垫状卷柏提取物做了较为系统的研究,为其在工业生产、药效物质基础、药品开发研究等方面提供一定的科学依据。
【图文】：

穗花杉,双黄酮,长扫描,全波

配成 0.515 mg/mL 的对照品溶液，备用。2.2 供试品溶液的制备精密称取经粉碎过 3 号筛的垫状卷柏药材 2.0 g，加入无水乙醇溶液 25 m热回流提取 60 min，过滤，取滤液定容至 100 mL 容量瓶中，0.45 μm 微孔过滤得供试品溶液，备用。2.3 液相检测条件的建立检测波长的选择15 版《药典》中穗花杉双黄酮检测波长为 330 nm，经 DAD 全波长扫描的紫外吸收光谱如图 2-1 所示，穗花杉双黄酮在 330 nm 处具有较强吸收，测波长选择 330 nm。

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以穗花杉双黄酮的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，，绘制标准曲线，计算线性回归方程。所得标准曲线如图2-3 所示。穗花杉双黄酮标准曲线的回归方程为：Y=5×107X+790122（R2=0.9935），其中 X 为穗花杉双黄酮的浓度（单位：mg/mL），Y 为穗花杉双黄酮峰面积，表明该回归方程在穗花杉双黄酮浓度为 0.0161-0.2575 mg/mL 范围内具有良好的线性关系。图 2-3 穗花杉双黄酮标准曲线Figure 2-3 The standard curve of amentoflavone2.2.5 精密度通过观测标准品溶液的日内精密度来测定该方法的精密度，溶液浓度选取线性范围的中间浓度。日间精密度：一天内连续进样 6 次。考察指标成分的保留时间和峰面积的 RSD 值，实验结果见表 2-2。
【学位授予单位】：浙江工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R284

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