人工虫草提取物和奥美沙坦对（前）肾素受体表达的影响及机制探讨

发布时间：2020-04-18 20:58

【摘要】：目的:研究人工虫草提取物和奥美沙坦对(前)肾素受体(PRR)表达的影响。方法:体内实验采用SD大鼠建立单侧输尿管梗阻(UUO)模型,随机分为假手术组、模型组、奥美沙坦组、百令胶囊组、奥美沙坦+百令胶囊组,于造模后第3d、7d和14d进行取材。采用PAS染色观察肾组织损伤;Masson染色观察肾组织纤维化程度;通过肾小管间质评分系统对肾损伤进行评分;分别提取肾组织总蛋白、胞膜蛋白和胞浆蛋白,用Western blot方法检测PRR及P-p38MAPK蛋白的表达。体外实验采用HEK-293细胞建立氧化应激模型和AngII刺激的细胞模型。氧化应激模型组分为:正常对照组、H_2O_2模型组、p38MAPK抑制剂(SB203580)组、人工虫草提取物组、SB203580+人工虫草提取物组;AngII模型组分组为:正常对照组、AngⅡ模型组、SB203580组、奥美沙坦组、SB203580+奥美沙坦组。通过CCK-8试剂盒检测细胞活性以筛选最佳刺激浓度,加药刺激12h后收集细胞,分别提取这两种细胞模型的总蛋白、胞膜蛋白和胞浆蛋白,用Western blot方法检测PRR及P-p38MAPK等蛋白的表达。实验数据均采用SPSS16.0统计软件进行统计学分析(P0.05提示差异具有统计学意义)。结果:1.大鼠肾组织形态学结果(1)PAS染色结果显示:造模第3天UUO大鼠肾组织可见肾小管轻度扩张,间质炎细胞少量浸润;第7天UUO大鼠肾组织中可见肾小管明显扩张,上皮细胞变性坏死,间质炎细胞浸润,肾间质宽度增加;第14天UUO大鼠肾组织中可见肾小管进一步扩张,并出现肾小管萎缩、间质炎细胞浸润及间质宽度进一步增加。(2)Masson染色结果显示:造模第3天UUO大鼠肾组织中未见肾间质胶原纤维;第7天UUO大鼠肾组织中可见少量肾间质胶原纤维;第14天UUO大鼠肾组织中肾间质胶原纤维进一步增加。(3)肾小管间质损伤评分结果显示:造模时间越长,肾小管扩张、炎细胞浸润及间质纤维化面积越大,肾小管损伤程度越重。造模第7天百令胶囊组、奥美沙坦组、百令胶囊+奥美沙坦组肾小管损伤评分均较模型组降低,差异有统计学意义(P0.05);造模第14天,肾小管损伤较重,出现部分不可逆性小管间质纤维化,各用药组肾小管损伤评分较模型组差异无统计学意义(p0.05)。2.Western blot结果(1)肾组织PRR蛋白的表达水平:造模第7天各组大鼠肾组织中总蛋白、膜蛋白PRR蛋白表达趋势一致,模型组表达明显高于假手术组(P0.05);奥美沙坦与百令胶囊两种药物均可减少UUO大鼠肾组织PRR蛋白的表达,两药联用时PRR蛋白表达最低,与模型组相较差异有统计学意义(P0.05);各组大鼠肾组织胞浆蛋白中的PRR表达未见明显差异(P0.05)。(2)肾组织P-p38MAPK蛋白的表达水平:造模第7天模型组与假手术组相比,P-p38MAPK蛋白表达量增高(P0.05),奥美沙坦和百令胶囊均可明显降低P-p38MAPK蛋白表达量,两种药物联合使用时P-p38MAPK蛋白表达量最低,与模型组相比具有统计学意义(P0.05)。(3)H_2O_2和AngII分别刺激HEK-293细胞12h,两种细胞模型的总蛋白、膜蛋白PRR表达趋势一致,H_2O_2模型组和AngII模型组PRR蛋白均较空白对照组增加(P0.05);SB203580组、人工虫草提取物组、SB203580+人工虫草提取物组PRR蛋白表达均低于H_2O_2模型组(P0.05);SB203580组、奥美沙坦组、SB203580+奥美沙坦组PRR蛋白表达低于AngII模型组(P0.05)。两种细胞模型各组胞浆蛋白中的PRR表达未见明显差异(P0.05)。各组P-p38MAPK蛋白与细胞总蛋白、膜蛋白中PRR的表达趋势一致。结论:本研究表明,人工虫草提取物和奥美沙坦可以通过抑制p38MAPK通路的激活,降低了PRR在肾小管上皮细胞胞膜的表达,从而抑制肾内RAS的活化,发挥保护肾小管作用。
【图文】：

附录,百令胶囊,间质,肾小管间质损伤

出现部分不可逆性小管间质纤维化；奥美沙坦组、百令胶囊型组稍有减少；奥美沙坦+百令胶囊组肾间质可见胶原纤维表达附录 1，图 6）组织肾小管间质损伤评分鼠肾组织形态学改变对肾小管间质损伤进行评分，主要通过三管管型，小管扩张，肾小管上皮细胞水肿、变性、坏死；②间质纤维化的程度。每个参数按 0~3 分评定：0：正常；1：轻度；2：中度受损，病变范围 15~50%；3：中度受损，病变范围>5为每个样品小管间质的评分，介于 0~9 之间。

细胞膜蛋白,肾组织,细胞浆,蛋白

P<0.05 ；#，与模型组相比，，P<0.05； Δ，与奥美沙坦+百模第 7 天各组肾组织总蛋白、细胞浆蛋白、细胞膜蛋白各组肾组织总蛋白、细胞浆蛋白、细胞膜蛋白 P 7 天各组大鼠肾组织中总蛋白、膜蛋白 PRR 表达术组（P<0.05）；奥美沙坦与百令胶囊两种药物达，两药联用时 PRR 表达最低，与模型组相较大鼠肾组织胞浆蛋白中的 PRR 表达未见明显差异测肾组织 P-p38MAPK 蛋白的表达水平（图 3）手术组；UUO：模型组；UUO+Olm：奥美沙坦组；UUO+CS：UUO+Olm+CS：奥美沙坦+百令胶囊组
【学位授予单位】：河南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

【参考文献】